换一批
换一批靶向人 BRG1基因的慢病毒载体构建及效率验证
Construction of lentiviral vector targeting human BRG1 gene and identification of its efficiency
摘要：
目的：构建靶向人 BRG1基因的短发夹 RNA（shRNA）慢病毒载体并验证其沉默效率。方法：设计3个针对人 BRG1基因的特异性 shRNA 序列（shBRG1），构建于 pLKO．1慢病毒载体中，并与 psPAX2和 pMD2．G 质粒共同转染293T 细胞以包装成慢病毒颗粒。将包装好的慢病毒感染人主动脉平滑肌细胞（HASMC），应用实时荧光定量 PCR 和 western blot 检测 BRG1 mRNA 和蛋白表达水平，判断其沉默效率。结果：3种 shBRG1干扰序列均成功插入慢病毒载体中且测序正确，3种慢病毒均可有效降低 BRG1 mRNA 表达水平（P 均＜0．01）。其中 shBRG1-3的沉默效率最高，其感染HASMC 后 BRG1蛋白表达水平较对照组显著下降（P ＜0．01）。结论：靶向人 BRG1基因的 shRNA 慢病毒表达载体构建成功，shBRG1-3慢病毒能够有效降低 BRG1 mRNA和蛋白表达水平。
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作者：
作者单位：
第二军医大学附属长海医院胸心外科, 上海,200433
[1]
期刊：
《国际心血管病杂志》2014年4期 264-267页
ISTIC
栏目名称：
基础研究
DOI：
10.3969/j.issn.1673-6583.2014.04.017
发布时间：
2014-09-09
基金项目：
国家自然科学基金(81300233)
上海市科委基础研究重点项目
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- 被引：1
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