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高效液相色谱-蒸发光散射法测定人肠黏膜通透性的方法学及其临床应用研究

Clinical Study and Technology of High Performance Liquid Chromatography with Evaporative Light Scattering Detector in Human Intestinal Permeability Evaluation

摘要:

目的 进行高效液相色谱-蒸发光散射法测定人肠黏膜通透性的方法学研究,同时应用此方法研究重度慢性乙型病毒性肝炎患者肠道屏障功能的变化并探讨其治疗方法.方法 (1)采用高效液相色谱-蒸发光散射法检测30例健康人(正常组)和90例重度慢性乙型病毒性肝炎患者尿乳果糖、甘露醇排泄率比值(L/M)的变化,同时测定血清二胺氧化酶(DAO)的变化,以此两项指标来反映肠道屏障功能的变化并将两组加以比较.(2)将90例重度慢性乙型病毒性肝炎患者按随机数字表法分为对照组、乳果糖组,谷氨酰胺组3组,每组30例.对照组采用常规治疗;乳果糖组在常规治疗的基础上加用乳果糖10 g,3次/d;谷氨酰胺组在常规治疗的基础上加用谷氨酰胺颗粒10 g,3次/d.疗程均为2周.于治疗前后分别测定3组患者的肝功能、内毒素(ET)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、DAO、白介素-2(IL-2)、白介素-8(IL-8)、T淋巴细胞亚群、L/M等,并采用协方差分析法加以比较.结果 采用高效液相色谱-蒸发光散射法测定L/M的变化,甘露醇和乳果糖能得到很好地分离,乳果糖的线性范围为0.65~13.0 μg/L(r=0.9980),甘露醇的线性范围为0.74~14.7 μg/L(r=0.9983).乳果糖和甘露醇日内精密度的相对标准偏差(RSD)分别为1.56%、0.65%(n=6),日间精密度的RSD分别为1.77%、0.99%(n=6).乳果糖的加样回收率为98.68%~100.4%,平均值为99.51%;甘露醇的加样回收率为99.52%~100.5%,平均值为99.94%.乳果糖在尿中的最低检测浓度为94.2 μg/L,甘露醇在尿中的最低检测浓度为29.9 μg/L.重度慢性乙型病毒性肝炎患者L/M、DAO水平明显升高(P<0.01).治疗2周后,与对照组相比,乳果糖组TBIL、ET、TNF-α的变化差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,谷氨酰胺组治疗后ALT、TBIL、 TNF-α、ET、IL-2、L/M、DAO的变化差异有统计学意义(P<0.05);乳果糖组与谷氨酰胺组相比,治疗后ALT、TBIL、 TNF-α、IL-2、L/M的变化差异有统计学意义(P<0.05).结论 (1)高效液相色谱-蒸发光散射法检测肠道通透性的准确度高,重复性好,方法简便,是目前临床评价肠黏膜通透性变化的实用方法.(2)与健康人相比,重度慢性乙型肝炎患者存在肠黏膜屏障的损伤.(3)在常规治疗的基础上加用乳果糖或谷氨酰胺对减轻重度慢性乙型病毒性肝炎患者的内毒素血症及炎症反应,降低肝功能水平都有一定的作用,但谷氨酰胺的作用更为显著,并且能纠正肠道屏障损伤.

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