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siRNA沉默Akt1基因的表达及其对脐静脉内皮细胞增殖的抑制作用

Inhibitory Effect of SIRNA on Expression of Akt1 and Proliferation of Umbilical Velns Endothelial Cells

摘要:

目的 筛选Aktl基因特异性小干扰RNA(small interference RNA,siRNA),观察siRNA对血管内皮细胞Aktl基因表达及增殖的影响.方法 人脐静脉内皮细胞(human umbilical veins endothelial cells,HUVECs)为靶细胞,设计、筛选和合成3对针对Aktl基因mRNA的siRNA(AktlsiRNA-1、AktlsiRNA-2和AktlsiRNA-3),利用阳离子脂质体介导转染HUVECs.分3组:仅加脂质体(Lip组);加Scramble siRNA组(Scr组);加AktlsiRNA组(AktI组).采用半定量RT-PCR技术检测AktlmRNA和Akt2mRNA的表达,用western blot技术检测Akt总蛋白表达.用3H-TdR掺入实验和流式细胞仪检测HUVECs的DNA合成和增殖指数.结果 筛选出的AktlsiRNA-1转染后24h细胞AktlmRNA表达水平明显下调(分别与Lip组、scr组相比,均为P<0.01),且对Akt2表达没有影响AktlsiRNA-1转染后48h,明显抑制了总Akt蛋白的表达(分别与Lip组、Scr组相比,均为P<0.05).转染AktlsiRNA-1组3H-TdR掺入量和增殖指数显著降低(分别与Lip组、Scr组相比,均为P<0.01).结论 特异性siRNA能够有效的抑制Aktl基因的表达,并明显抑制血管内皮细胞的增殖.

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