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半乳糖化壳聚糖-低分子聚乙烯亚胺/DNA复合物的肝靶向性研究

Hepatocyte-targeted gene transfection of galactosylated chitosan-graft low molecular polyethyleneimine/DNA complexes

摘要:

目的:研究半乳糖化壳聚糖-低分子聚乙烯亚胺(galactosylated chitosan-graft-polyethyleneimine,GC-PEI)/DNA复合物在体内外的肝靶向性.方法:GC-PEI与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP) 质粒(pEGFP-Cl)在0.01 mol/L PBS,150 mmol/L NaCl,5%葡萄糖溶液中自组装成3种不同溶媒介导的GC-PEI/ DNA复合物,检测复合物粒径大小与形态,Zeta 电位以及结合和保护DNA 的能力;并进一步测定GC-PEI聚合物的毒性,研究复合物的肝靶向转染效率.结果:在GC-PEI与DNA质量比为1∶1~2.5∶1时,GC-PEI聚合物能有效地结合和保护所携带的DNA免受核酸酶和血清的降解.复合物粒子呈规则的球形,有明显的核壳结构.GC-PEI聚合物在检测细胞中未显示出明显毒性;动物体内急性毒性实验显示:通过尾静脉注射50~300 μg的GC-PEI聚合物入小鼠后,实验小鼠2周内无急性毒性反应和死亡发生.荧光显微镜和流式细胞仪检测证实GC-PEI/DNA复合物在肝细胞系(QSG7701/core,L02)中的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达明显高于非肝细胞系(SGC-7901,HBE)细胞.体内实验表明转染48 h后,小鼠肝组织在荧光显微镜下可以检测到明显的绿色荧光,而其他主要脏器未见明显荧光.结论:GC-PEI聚合物能够在体内外特异性将外源基因或DNA导入肝细胞,具有良好的肝靶向性.

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