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白血病细胞株KG1中Mxi1突变基因真核表达载体的构建

Construct Mxi1 Mutation Gene Expression Vector from Leukemia Cell Line KG1

摘要:

目的 构建Max结合蛋白1(Max interacting protein 1,Mxil)基因的野生型和突变型真核表达载体,观察表达载体转染真核细胞后蛋白表达的情况.方法 将正常人和白血病细胞株KG1细胞的Mxi1野生型/突变型基因cDNA插入到红色荧光蛋白质粒pDs-red2-N1中,构建为pDs-red2-N1/Mxi1(野生型/突变型)真核表达载体;采用脂质体方法将质粒转染Cos-7细胞;荧光显微镜观察Cos-7细胞红色荧光蛋白表达情况.流式细胞仪方法检测红色荧光蛋白中Mix1的基因表达率,以此计算转染效率.转染后48 h提取细胞总RNA,进行RT-PCR检测Mxi1基因表达.结果 成功构建了一种pDs-red2-N1/Mxi1(野生型/突变型)真核表达载体.荧光显微镜下观察转染后Cos-7细胞可见红色荧光蛋白的表达;流式细胞仪检测野生型和突变型的转染效率以转染后前3d较高,并可持续至第6d.质粒转染Cos-7细胞后均出现阳性Mxi1基因转录产物.RT PCR方法可以检测到Mxi1基因在Cos-7细胞中的表达.结论 Mxi1的真核表达载体构建成功,通过脂质体的方法转染真核细胞中并在其胞浆中表达.

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