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二型谷氨酸羧肽酶稳定表达细胞株的建立

Estahlishment of a cell strain stably expressing glutamate carboxypeptidase Ⅱ

摘要:

为了深入研究二型谷氨酸羧肽酶(glutamate carboxypeptidase Ⅱ,GCP Ⅱ)功能和了解其在兴奋性氨基酸代谢过程中作用,拟构建GCP Ⅱ的表达载体,建立稳定表达细胞株; 采用聚合酶链反应,酶切连接,和蓝白筛选的方法,构建表达载体;磷酸钙共沉淀的方法转染HEK293细胞,G418筛选阳性细胞克隆;逆转录聚合酶链反应和免疫荧光细胞染色的方法鉴定阳性细胞株.采用PCR方法扩增出GCP Ⅱ;构建含有GCP Ⅱ基因的表达载体--pcDNA3.1-NA;建立了细胞株 HEK 293-NA.成功构建了GCP Ⅱ的表达载体,建立了稳定表达细胞株,为深入研究该酶的功能和兴奋性氨基酸毒性作用奠定了基础.

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