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人血管紧张素Ⅱ2型受体AT2R重组细胞系的构建与鉴定

Construction and characterization of human angiotensin Ⅱ type 2 receptor AT2R overexpression cell line

摘要:

目的:构建人血管紧张素Ⅱ 2型受体(hAT2R)过表达稳定细胞系,探讨AT2R激动剂Compound 21等对前列腺癌细胞的作用及机制.方法:构建含hAT2R基因的慢病毒表达载体pLV-CMV-hAT2R-IRES-eGFP并包装成慢病毒.将重组慢病毒载体pLV-CMV-IRES-eGFP-hAT2R感染前列腺癌细胞,并利用流式细胞术筛选出单克隆细胞株,RT-PCR及Western blot方法检测重组细胞系中hAT2R表达水平,使用AT2R激动剂CGP42112检测受体功能.结果:重组慢病毒载体感染PC-3、DU145前列腺癌细胞24 h后均能观察到eGFP表达,用流式细胞术分别筛选出单克隆细胞株,RT-PCR及Western blot检测结果显示目的基因hAT2R在两株重组细胞系中表达显著升高,CGP42112处理24h后,重组细胞系细胞活力较正常PC-3、DU145细胞显著降低.结论:成功构建hAT2R过表达稳定细胞系.

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作者: 陈惠莹 [1] 毛莹莹 [1] 裴娜娜 [2] 颜仁和 [3] 万鹏飞 [3] 李红卫 [1]
作者单位: 南方医科大学检验与生物技术学院,广东广州,510515 [1] 暨南大学附属第一医院病理科,广东广州,510163 [2] 广州伯尼兹生物科技有限公司,广东广州,510663 [3]
分类号: Q291
DOI: 10.11778/j.jdxb.2019.03.001
发布时间: 2019-08-08
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