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Dll4基因靶向RNAi重组腺相关病毒载体的构建和高滴度病毒制备

Construction of recombined adeno-associated virus vector expressing DⅡ4 short RNA interference and preparation of high-titer virus

摘要:

目的:构建一个表达肿瘤血管生成调节基因Delta-like ligand 4(DⅡ4)小干扰RNA的重组腺相关病毒载体,制备靶向性抑制DⅡ4表达的高滴度重组腺相关病毒.方法:将包含肿瘤血管生成调节基因DⅡ4特异性小干扰RNA片段的质粒用EcoRI+SalI双酶切,回收目的片段,将pSNAV2.0质粒用EcoRI+SalI双酶切后同目的片段连接,脂质体法转染BHK-21细胞,G418筛选后以辅助病毒感染获取病毒.结果:PCR和测序证实,成功构建包含U6启动子和肿瘤血管生成调节基因DⅡ4特异性RNA干扰片段的重组腺相关病毒载体,并制备出滴度为2.4×1011vectorgenome/L高滴度腺相关病毒.结论:成功构建携带DⅡ4基因短发夹状干扰RNA的腺相关病毒载体.为下一步探索抗肿瘤血管生成基因治疗的新途径提供实验基础.

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