换一批
换一批NK细胞表面受体KIR2 DS1 mRNA表达水平检测方法的建立
Establishment of a RT-PCR assay for detection of mRNA expression of KIR2DS1 gene on NK cell surface
摘要：
目的 建立检测NK细胞表面免疫球蛋白样受体基因KIR2DS1 mRNA表达水平的荧光定量PCR方法并评价其性能.方法 以行异基因造血干细胞移植的供患者共57对为研究对象,针对KIR2DS1基因设计特异性引物及探针,构建TaqMan-MGB荧光定量PCR反应体系,并评价该实验方法的性能,包括:总符合率、重复性、灵敏度及仪器适用范围、技术人员再现性.结果 以KIR-SSO基因定性分型法为金标准,通过检测其中35例样品,荧光定量PCR方法对KIR2DS1基因阳性及阴性检测率均为100％.在重复性试验中,选取Ct值分别为高、中、低值3个样品的批内、批间CV分别为0.09％～0.46％、0.71％～1.13％.该方法的灵敏度达102 copies/μL,且对拷贝数为102 copies/μL的3个样品进行5次重复试验的CV分别为5.37％、2.71％、5.51％.仪器比对结果显示,参比仪器ABI-7500与实验仪器LC-480之间的拟合直线回归方程为Y=0.9736X+0.1183(R2=0.9619,R2>0.95).2名技术人员对10个KIR2DS1基因阳性样品的再现性比对试验结果显示其偏倚(％)均<±5％.结论 建立了TaqMan-MGB荧光定量PCR检测KIR2DS1 mRNA表达水平的检测方法,其性能良好.
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作者：
作者单位：
苏州大学附属第一医院临床检测中心,江苏苏州,215006
[1]
苏州大学附属第一医院&江苏省血液研究所HLA配型实验室,江苏苏州,215006
[2]
苏州大学附属第一医院临床检测中心,江苏苏州215006;苏州大学附属第一医院&江苏省血液研究所HLA配型实验室,江苏苏州215006
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期刊：
《临床检验杂志》2019年37卷11期 825-830页
ISTIC
分类号：
R446
栏目名称：
临床检验技术研究
DOI：
10.13602/j.cnki.jcls.2019.11.06
发布时间：
2020-01-07
基金项目：
国家自然科学基金
江苏省医学创新团队与领军人才项目
江苏省社会发展重点项目临床前沿技术
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