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地黄多糖对过表达Notch1(NICD)大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化及增殖的影响

Effect of rehmannia glutinosa polysaccharide on the differentiation and proliferation of over-expressed Notch1 (NICD)gene in rat bone marrow mesenchymal stem cells in vitro

摘要:

目的:探讨地黄多糖对过表达Notch1(NICD)大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)诱导分化及增殖的影响。方法以P3~P5代大鼠B MS C s为研究对象,将细胞随机分为正常对照组、空载体组和转染组。脂质体法转染Notch1(NICD)过表达真核载体,转染后以地黄多糖(0.2 mg/mL)进行诱导分化,转染和诱导后行细胞一般状态观察,采用免疫细胞化学法和Western blotting法检测Notch1(NICD)蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达,CCK-8检测细胞存活率。结果转染后转染组细胞似神经胶质样细胞形态改变,诱导后各组细胞似神经元样细胞形态结构,转染组显著。转染组Notch1和GFAP蛋白表达阳性率显著高于正常对照组和空载体组(P<0.05),而NSE在3组间差异无统计学意义(P>0.05);诱导后转染组NSE阳性率高于正常对照组和空载体组(P<0.05)。转染后与诱导后比较,转染组Notch1表达阳性率降低(P<0.05),且正常对照组与空载体组亦降低(P<0.05);转染组NSE表达阳性率明显升高(P<0.01),且正常对照组与空载体组明显升高(P<0.01);转染组GFAP表达阳性率明显降低(P<0.01)。CCK-8检测显示,地黄多糖诱导后,随时间延长各组细胞存活率略呈下降趋势。结论转染高表达Notch1(NICD)大鼠BMSCs具有向神经胶质样细胞分化倾向,地黄多糖显著抑制Notch1蛋白的表达,诱导BMSCs向神经元样细胞分化。

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