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蛋白激酶C-细胞外信号调节激酶1/2通路介导精氨酸升压素对成年大鼠心肌成纤维细胞的促增殖作用

Arginine vasopressin stimulates proliferation of adult rat cardiac fibroblasts via protein kinase C-extracellular signal-regulated kinase 1/2 pathway

摘要:

精氨酸升压素(arginine vasopressin, AVP)是高血压和心力衰竭时激活的神经体液和血流动力学因子,同时,它还具有直接的生长刺激作用.我们以往的研究显示AVP可诱导新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts, CFs)增殖.本研究旨在进一步观察AVP是否对成年大鼠CFs具有促增殖作用,并探计其机制.采用组织块法培养成年大鼠CFs,用[3H]-TdR掺入法和流式细胞仪方法观察AVP作用下CFs的DNA合成和细胞周期分布.根据特异性底物髓磷脂基质蛋白(myelin basic protein, MBP)的磷酸化水平测定细胞外信号调节激酶1/2 (extracellular signal-regulated kinase 1/2, ERK1/2)的活性.用Western blot检测ERK1/2的磷酸化和p27Kip1、细胞周期蛋白D1、 A、 E的表达.结果显示,AVP(0.1μmol/L)可促进成年大鼠CFs的DNA合成,该作用可被V1受体拮抗剂d(CH2)5[Tyr2(Me),Arg8]-vasopressin (0.1μmol/L)阻断,而不受V2受体拮抗剂desglycinamide [d(CH2)5, D-Ile2, Ile4, Arg8]-vasopressin (0.1μmol/L)的影响.AVP可激活ERK1/2,用蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)激动剂佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA, 30nmol/L, 5min)急性刺激可模拟该作用,而PMA持续慢性作用(2.5μmol/L,24h)耗竭PKC后则抑制AVP对ERK1/2的激活.AVP可抑制p27Kip1的蛋白表达,升高细胞周期蛋白D1、 A和E的表达,同时促进细胞周期由G0/G1期进入S期.ERK1/2抑制剂PD98059 (30μmol/L)阻断AVP对DNA合成、p27Kip1、细胞周期蛋白D1、A和E蛋白表达的作用,并抑制细胞周期进程.以上结果表明,AVP可促进成年大鼠CFs增殖,该作用由V1受体和PKC-ERK1/2通路介导.AVP可通过ERK1/2调控p27Kip1、细胞周期蛋白D1、A和E的表达,从而促进成年大鼠CFs的细胞周期进程.

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