换一批产腈水合酶重组大肠杆菌的质粒稳定性研究
Study on Plasmid Stability of a Recombinant Escherichia coli Producing Nitrile Hydratase
摘要成功构建了腈水合酶(nitrile hydratase,NHase)高表达的重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pETNHM(Kanr),研究了重组质粒pETNHM在重组菌株中的质粒稳定性.结果表明,pETNHM具有较好的结构稳定性,连续传代60代后质粒的基因序列没有明显缺失,且能够正常表达腈水合酶.pETNHM具有分离不稳定性,在无抗生素选择压力下,连续传代48代后质粒丢失的无质粒细胞开始出现.琼脂糖凝胶电泳定量分析表明,2/3的质粒pETNHM以二聚体形式存在,导致质粒拷贝数的下降.进一步研究表明,重组细胞的连续高速分裂及腈水合酶的高表达也会造成质粒拷贝数的下降,从而降低其分离稳定性.反之,重组菌株相对于宿主菌株的较高比生长速率有利于保持含质粒细胞的生长优势,卡那霉素的选择压力则能够保证质粒的稳定遗传.
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分类号
Q81（生物工程学《生物技术》）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1671-8135.2005.08.014
发布时间
2005-10-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（20206014）
全国百篇优秀博士学位论文作者专项（200345）
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