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SHIP基因真核表达载体的构建、鉴定及其表达抑制白血病细胞增殖的实验研究

Construction, Identification and Expression of Recombinant Eukaryotic Vector pCAG-IRES-SHIP-GFP on Porliferation of Leukemia Cell Line K562

摘要:

构建真核表达载体pCAG-IRES-SHIP-GFP,并观察其在K562细胞中的表达.将SHIP逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)产物克隆入pCAG-IRES-GFP,经酶切、PCR鉴定及测序分析,构建pCAG-IRES-SHIP-GFP重组真核表达载体;采用脂质体转染法将pCAG-IRES-SHIP-GFP及空载体转入K562细胞,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)、Western blot方法检测转染前后K562细胞中SHIP mRNA和蛋白的表达及Akt磷酸化水平改变,MTT、流式细胞仪检测等方法观察野生型SHIP基因表达对白血病细胞K562凋亡的影响.结果显示重组后的pCAG-IRES-SHIP-GFP质粒已成功载入SHIP的全长编码基因,序列测定的结果与预期设计完全一致.荧光显微镜下可见在转染pCAG-IRES-SHIP-GFP的K562细胞中存在荧光分布.外源性SHIP基因表达能使K562细胞增殖受抑;Western blot检测提示K562细胞Akt308和Akt473的磷酸化水平较转染前显著下调,分别为转染前的38.7%和36.8%(P<0.01).上述结果表明基因全长3.5kb的人野生型SHIP基因真核表达载体质粒pCAG-IRES-SHIP-GFP构建成功,并在K562细胞中表达;外源性SHIP基因表达能使K562细胞凋亡增加;这些改变可能与p-Akt表达下调有关.

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作者: 杨琳 [1] 罗建民 [1] 刘小军 [1] 成志勇 [1] 温树鹏 [1] 杜行严 [1] 杨晓阳 [1] 武学文 [1]
期刊: 《中国生物工程杂志》2009年29卷6期 14-19页 ISTICPKUCSCD
分类号: R733.4R730.231
栏目名称: 研究报告
发布时间: 2009-07-15
基金项目:
国家自然科学基金 河北省自然科学基金
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