禽流感病毒H9N2血凝素基因和神经氨酸酶基因在真核酵母菌中的表达
Expression of the Hemagglutinin and Neuramidinase Gene of Influenza A Virus H9N2 in P.methanolica
目的:克隆、表达和鉴定禽流感病毒H9N2血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础.方法:在成功克隆禽流感病毒H9N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMET A上,构建了重组表达质粒pMETA/HA(52~1 545bp),pMET A/NA(121~1 254bp),电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Westem blotting和ELISA方法检测其抗原性.结果:重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示蛋白表达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95%以上,ELISA和Western blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性.结论:成功克隆和表达了禽流感病毒H9N2 HA、NA基因序列,为禽流感病毒H9N2诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础.
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