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小干扰RNA沉默DEK基因对肝癌HepG2细胞凋亡的影响

Influence of small interfering RNA silencing DEK gene on hepatoma HepG2 cell apoptosis

摘要:

目的 探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默DEK基因表达对肝癌细胞株HepG2凋亡的影响及其相关分子机制.方法 常规培养人肝癌细胞株HepG2,分为空白对照组、对照siRNA组和DEK siRNA组.对照siRNA组和DEK siRNA组在LipofectamineTM 2000脂质体介导下进行对照siRNA表达载体和DEK siRNA表达载体的转染;空白对照组正常培养,不做任何处理.采用实时PCR法检测3组细胞DEK mRNA表达情况,采用Western blot法检测3组细胞DEK蛋白、caspase-3、B淋巴细胞瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2 protein,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)表达情况,采用流式细胞术观察3组细胞周期和细胞凋亡率.结果 转染48 h后,DEKsiRNA组DEK mRNA(0.420±0.050)和蛋白表达水平(o.311±0.038)及S期细胞比率[(20.713±1.529)%]、G2/M期细胞比率[(20.030±4.833)%]、Bcl-2蛋白表达水平(0.342±0.061)明显低于空白对照组[0.826±0.052、0.691±0.073、(25.553±2.109)%、(26.560±4.766)%、0.599±0.075]和对照siRNA组[0.776±0.051、0.726±0.061、(24.210±2.463)%、(29.365±4.891)%、0.686±0.079] (P<0.05),Go/G1期细胞比率[(59.257±4.767)%]、细胞凋亡率[(10.325±0.791)%]、Bax(0.610±0.038)和caspase-3蛋白表达水平(0.716±0.054)高于空白对照组[(47.887±3.753)%、(5.697±0.508)%、0.280±0.059、0.373±0.044]和对照siRNA组[(46.425±3.354)%、(6.547±0.674)%、0.340±0.045、0.321±0.049](P<0.05);空白对照组与对照siRNA组比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 特异性DEK siRNA可针对性下调HepG2细胞中DEK基因表达,促进HepG2细胞凋亡,可能与下调Bcl-2表达、上调caspase-3和Bax表达有关.

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作者: 李伟伟 [1] 申保生 [1] 宋新文 [1] 王宏伟 [1]
栏目名称: 基础研究
DOI: 10.13507/j.issn.1674-3474.2017.12.007
发布时间: 2018-01-10
基金项目:
河南省卫生厅资助项目
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