禽流感病毒H9N2血凝素基因和神经氨酸酶因在大肠杆菌中的表达-论文-万方医学网

禽流感病毒H9N2血凝素基因和神经氨酸酶因在大肠杆菌中的表达

Expression of the Hemagglutinin and Neuramidinase Gene of Influenza A Virus H9N2 in E.coli

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摘要：

克隆、表达和鉴定禽流感病毒H9N2 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础.在成功克隆禽流感病毒H9N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表达质粒pET32a(+)/HA(截短)、pET32a(+)/NA(截短)、pGEX4T-1/HA、pGEX4T-1/NA,转化大肠杆菌BL21/rosetta,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱和GSTrap 4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotring和ELISA方法检测其抗原性.结果重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致.ELISA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性.本研究成功克隆和表达了禽流感病毒H9N2 HA、NA基因序列.为禽流感病毒H9N2诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础.

作者：张烨 ^[1] 于在江 ^[1] 辛丽 ^[1] 陈永坤 ^[1] 唐启慧 ^[2] 陈禹保 ^[3] 陈清轩 ^[2] 舒跃龙 ^[1]

作者单位：中国疾病预防控制中心,病毒病所国家流感中心,北京,100052 ^[1] 北京标凯科技有限公司,北京,100094 ^[2] 北京中亚国瑞生物经济研究所,北京,102206 ^[3]

期刊：《微生物学通报》2010年37卷6期 881-887页 ISTICPKUCSCD

关键词：禽流感病毒H9N2 血凝素神经氨酸酶克隆表达

主题词：禽流感(Influenza in Birds)病毒(Viruses)基因(Genes)神经氨酸酶(Neuraminidase)大肠杆菌(Escherichia coli)

分类号： S852.65

栏目名称：简报

发布时间： 2011-07-29

基金项目：

国家科技支撑计划资助项目

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