换一批单增李斯特菌InternalinA的表达、纯化及多克隆抗体的制备
Expression and purification of InternalinA from Listeria monocytogenes and preparation rabbit polyclonal antibody against InternalinA
摘要[目的]克隆表达单增李斯特菌膜表面蛋白InternalinA (InlA),经免疫家兔获得多克隆抗体,为建立其免疫磁珠富集快速检测方法奠定基础.[方法]利用生物软件设计单增李斯特菌inlA 基因的引物,通过PCR扩增出inlA基因,并将其克隆至pET28a(+)原核表达载体,转化大肠杆菌BL21进行优化表达.镍柱纯化表达产物,质谱鉴定重组蛋白,ELISA分析其免疫原性.免疫家兔,制备其多克隆抗体.间接ELISA检测多抗的效价及交叉性,免疫荧光分析多抗与单增李斯特菌菌体结合的特异性.[结果]成功表达了InlA 蛋白,融合表达产物分子量约为92 kD,质谱鉴定其为InlA蛋白;免疫家兔获得的抗血清效价为1:100 000,除与金黄色葡萄球菌约20％的交叉外,与副溶血弧菌等其它病源菌均无交叉;免疫荧光证实该多抗特异性结合于单增李斯特菌膜表面,与同种属的威尔斯李斯特菌不结合,[结论]成功制备了单增李斯特菌特异性的兔多克隆抗体,为单增李斯特菌免疫磁珠富集快速检测方法的建立奠定了基础.
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