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腺相关病毒载体对心肌细胞感染和外源基因表达的作用

Effect of adeno-associated virus carrier on infection of cardiac myocytes and expression of exogenous genes

摘要:

目的:为进一步研究肌质网钙 ATP酶转基因在心力衰竭中的质粒价值,并观察腺相关病毒对心肌细胞感染的动态过程和对外源基因的表达能力. 方法:构建含肌质网钙 ATP酶的腺相关病毒载体( recombinant adeno-associated virus-sarcoplasmic reticulum calcium ATPase 2a, rAAV SERCA2a),利用激光共聚焦显微镜观察了活体异硫氰酸荧光素标记的腺相关病毒( fluorescein isothiocyanate-rAAV, FITC-rAAV)进入心肌细胞的过程,利用流式细胞仪检测含绿色荧光蛋白的腺相关病毒 rAAV GFP感染心肌细胞后绿色荧光蛋白表达细胞的百分率. 结果:构建、生产的重组病毒 rAAV-SERCA2a的滴度为 7× 1014 v@ g/L,并可以有效介导肌质网钙 ATP酶基因转录; FITC-rAAV感染心肌细胞后,大约 15 min可见病毒吸附在细胞膜上, 30 min 时可大部分进入细胞内;未加丁酸钠组腺相关病毒介导的绿色荧光蛋白表达效率最高达 33.3%,加用丁酸钠组该数据为 48.7%. 结论:成功构建了含肌质网钙 ATP酶的腺相关病毒载体,该病毒可有效介导目的基因的表达.在体外腺相关病毒能有效感染心肌细胞,感染后的心肌细胞能有效表达外源基因.

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