脉冲电磁场对成骨细胞-破骨细胞复合培养体系中成骨细胞膜电位及细胞内钙离子的影响
Influence of the pulsed electric-magnetic field on cell membrane potential and calcium ions of osteoblast in the osteoblast-osteoclast co-culture system
目的:探讨脉冲电磁场(pulsed electric-magneticfields,PEMF)对体外培养成骨细胞-破骨细胞复合体系中成骨细胞膜电位及细胞内游离钙离子浓度的影响,为脉冲电磁场治疗骨质疏松寻找理论依据.方法:体外分离、培养1 d龄SD乳鼠颅骨成骨细胞和四肢骨破骨细胞,利用共育培养板将两者培育在同一环境中;实验分空白组、维拉帕米组、河豚毒素组及维拉帕米+河豚毒素组,根据荧光探针DiBAC4(3)及Fluo-3/AM能与活细胞细胞膜及胞内钙离子特异性动态结合后发出荧光的特性,分别对各组成骨细胞进行膜电位和钙离子荧光染色,染色后利用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)技术分别测量各组行PEMF处理前后荧光强度的改变,以间接反应细胞膜电位、细胞内钙离子浓度的变化.结果:在行PEMF处理前各组细胞细胞膜电位及细胞内钙离子浓度稳定在一定基线水平(空白组细胞膜电位及细胞内钙离子浓度的荧光基准值分别为:(37.68±1.81)和(164.24±2.82),而在PEMF作用后,空白组细胞胞内膜电位荧光值于40 s后开始升高,150 s左右达峰值(75.05±2.27),表明细胞膜电位出现了去极化;而钙荧光值的升高出现在PEMF作用后约60 s时,120 s后达到峰值(237.22±2 67),且升高后在PEMF作用过程中一直稳定在一定水平.PEMF使细胞出现去极化的效应能被钠通道阻断剂河豚毒素所阻断,而钙通道阻断剂维拉帕米对其没有明显的影响;但河豚毒素及维拉帕米均能使PEMF升高细胞内钙离子浓度的效应受阻.结论:PEMF作用于成骨细胞钠离子通道引致细胞出现去极化,从而开放电压依赖型钙离子通道而升高细胞内钙离子浓度,钙离子作为细胞内第二信使,介导PEMF对成骨细胞功能的调节作用.
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