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RNA干扰Id2基因表达抑制PC-3前列腺肿瘤干细胞的增殖及侵袭能力

RNA interferes with Id2 gene expression to inhibit proliferation and invasion of PC-3 prostate cancer stem cells

摘要:

背景:Id基因是碱性螺旋-环-螺旋因子的内源性负性调节因子.该因子参与细胞的增殖、分化和生存, 并在不同类型肿瘤的进展和浸润过程中表现出功能的多样性.目的:探讨沉默Id2基因表达对人前列腺肿瘤干细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:取对数生长期的PC-3人前列腺癌细胞, 采用无血清悬浮培养法分离肿瘤干细胞球, 流式细胞仪检测肿瘤干细胞表面标记CD44+CD24-表达.构建sh RNA-Id2表达载体, 转染至前列腺肿瘤干细胞, 以未转染的前列腺肿瘤干细胞为对照.转染后48 h, 采用RT-PCR与Western blot实验检测前列腺肿瘤干细胞Id2基因及蛋白的表达;采用MTT法、Transwell小室检测前列腺肿瘤干细胞的增殖和侵袭能力;采用Western blot与RT-PCR检测前列腺肿瘤干细胞上皮标志物E-钙黏蛋白、间质细胞标志物波形蛋白及上皮细胞-间充质转化调控转录因子Twist的表达.结果与结论: (1) 采用无血清悬浮培养法成功分离出肿瘤干细胞球, 第3代前列腺肿瘤干细胞表面标记CD44+CD24-表达率为 (85.69±8.96) %, 显示培养的肿瘤干细胞球高表达肿瘤干细胞表型; (2) 转染后48h, sh RNA-Id2转染组细胞Id2基因及蛋白表达明显低于未转染组 (P <0.05), 显示成功干扰了前列腺肿瘤干细胞Id2表达; (3) shRNA-Id2转染组前列腺肿瘤干细胞的增殖速度和侵袭能力低于未转染组 (P<0.05); (4) sh RNA-Id2转染组前列腺肿瘤干细胞的上皮标志物E-钙黏蛋白表达高于未转染组 (P<0.05), 间质细胞标志物波形蛋白、上皮细胞-间充质转化调控转录因子Twist表达低于未转染组 (P <0.05); (5) 结果表明, RNA干扰Id2基因表达可通过调控E-钙黏蛋白、波形蛋白及Twist表达抑制前列腺肿瘤干细胞的增殖及侵袭能力.

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作者: 张莹莹 [1] 王英磊 [2] 孟琳 [2] 肖琳 [2] 李忠海 [2] 赵战魁 [2] 吴厚苛 [2]
期刊: 《中国组织工程研究》2019年23卷9期 1342-1348页 ISTICPKUCA
分类号: R459.9R394.2
栏目名称: 肿瘤干细胞
DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.1623
发布时间: 2019-06-06
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