换一批体外诱导人骨髓间充质干细胞转化为心肌样细胞的基因表达
Bone marrow derived from human mesenchymal stem cells induced into cardiomyocytes expressing ANP,BNP.α-skeletal actin,MLC-2v,GATA-4 and Nkx2.5
摘要目的:观察5-氮胞苷(5-aza)在体外诱导人骨髓间充质干细胞转化为心肌样细胞的心钠素(ANP)、脑钠素(BNP)、α-骨骼肌动蛋白(α-skeletal actin)、肌球蛋白轻链-2v(MLC-2v)、锌指结构转录因子(GATA-4)和心脏特异同源转录因子(Nkx2.5)基因表达.方法:取非血液疾病的5例胸科手术患者术中已切除掉的肋骨,抽取骨髓.利用淋巴细胞分离液行密度梯度离心法和差异贴壁法进行分离、提纯骨髓问充质干细胞,并进行培养扩增.用流式细胞仪对第2代的骨髓间充质干细胞细胞表面抗原进行测定.应用10 μmol/L 5-aza对第2代的骨髓间充质干细胞诱导24h,于诱导后1,2,3及4周,用反转录.聚合酶链反应检测ANP、BNP、α-skeletal actin、MLC-2v、GATA-4和Nkx2.5基因表达.结果:3份第2代骨髓间充质干细胞样本重复测定,表达CD29,CD44,不表达CD34,CD45.以5-aza诱导培养24 h后,骨髓间充质干细胞形态和排列方式发生明显变化,诱导1周后,细胞体积增大,多呈长梭行,平行排列;诱导2周后,细胞变为短柱状,突起位于2端,相邻细胞的突起紧密接触;诱导3周后,短柱状细胞的突起相互连接,部分细胞可见类肌管样结构;诱导4周后,细胞体积变小,可见由几个细胞连接形成的多核肌管样结构.诱导组细胞ANP、BNP、α-skeletal aetin、MLC-2v、GATA-4和Nkx2.5的聚合酶链反应产物凝胶电泳呈阳性,对照组为阴性,诱导组基因表达量均随着时间延长逐渐增加.结论:5-aza可诱导骨髓间充质于细胞向心肌样细胞转化,其处于祖心肌细胞和分化的心肌细胞之间,并可能具有心肌细胞的功能.
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DOI
10.3969/j.issn.1007-5062.2010.01.014
发布时间
2010-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
沈阳军区总医院重点医学科研基金课题（(2006Y-Z07)）
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