c-Jun对硫氧还蛋白还原酶1启动子转录的调控作用
c-Jun positively regulates transcription of thioredoxin reductase 1 gene through direct binding to its promoter
目的:探讨转录因子激活剂蛋白-1(activator protein-1,AP-1)家族成员c-Jun对硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase 1,TrxR1)启动子转录的调控作用.方法:利用生物信息学技术分析调控TrxR1启动子区域的转录因子,构建TrxR1启动子区域一系列截短的萤光素酶报告基因载体,将含c-Jun的真核表达载体pcDNA3.1(+)-c-Jun和含有TrxR1启动子的萤光素酶报告基因载体共转染人胚肾HEK293细胞和鼠心肌H9c2细胞,检测转染细胞中萤光素酶活性.应用定点突变技术针对TrxR1启动子区域AP-1的可能结合位点进行突变,与c-Jun的真核表达载体共转染上述2种细胞,检测各组萤光素酶活性.利用染色质免疫共沉淀(ChIP),分析c-Jun与TrxR1启动子区域的AP-1结合位点结合情况.结果:酶切及测序结果表明,获得的3个不同长度的TrxR1启动子克隆与GenBank DNA序列数据库对比分析序列一致,且插入方向正确;此3种质粒都有明显的启动子活性,在人胚肾HEK293和鼠心肌H9c2细胞中转染pcDNA 3.1(+)-c-Jun可以上调TrxR1启动子活性.突变AP-1结合位点,导致TrxR1启动子活性明显降低;ChIP结果显示c-Jun结合在TrxR1启动子区域的AP-1结合位点上.结论:转录因子AP-1家族成员c-Jun可能通过与TrxR1基因启动子区域AP-1结合位点相结合,上调TrxR1基因的转录.
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