换一批氢醌诱导下肝细胞PCNA、RAD6B及RAD18基因mRNA表达的时间效应
Study on time-effect of PCNA, RAD6B and RAD18 mRNA expression induced by hydroquinone in L-02 hepatic cells
摘要目的 研究氢醌(hydroquinone,HQ)诱导下L-02肝细胞PCNA、RAD6B及RAD18基因mRNA表达的时间效应,探讨PCNA、RAD6B及RAD18基因在HQ所致肝细胞毒性过程中的分子作用机制.方法 体外培养的L-02肝细胞经40 μmol/L的HQ诱导不同时间(6、12、24和48 h)后,用Trizol试剂从L-02肝细胞中分离总RNA,而后反转录为cDNA;利用Primer 3软件设计PCNA、RAD6B及RAD18基因及内参照β-ACTIN基因的引物,并进行标准曲线分析和熔解曲线分析,建立和优化定量检测各目的 基因在mRNA水平上表达的反应体系和反应条件;最后采用实时荧光定量PCR法检测不同时间点PCNA、RAD6B及RAD18基因mRNA的表达状况.结果在各时间处理组(6、12、24和48 h)中,染毒组L-02肝细胞内PCNA、RAD6B及RAD18基因在mRNA水平上的表达均高于未染毒组.在24 h的时间范围内,PCNA基因在mRNA水平上的表达无论是染毒组(40 μmol/L)还是未染毒组(0 μmol/L),均具有随时间的延长而增加的趋势;到24 h时,相对表达量达到最大值.RAD6B和RAD18基因在未染毒组中的表达在48 h范围内均有随时间的增加而升高的趋势,它们均在48 h时间点上表达最高,其相对表达量分别为2.66和4.32;但在染毒组中,RAD6B基因和RAD18基因在48 h处的表达则有所下降,其相对表达量分别由3.74和4.83降至2.78和4.61.结论 HQ可以诱导PCNA、RAD6B及RAD18基因mRNA的表达上调,并且呈现一定的时序性.
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