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DKK1-siRNA 真核表达载体的构建及其对骨质疏松大鼠治疗作用的研究

Construction of DKK1-siRNA eukaryotic expression vectors and the therapeutic effect on osteoporotic rats

摘要:

目的:针对DKK1基因构建两段小干扰RNA( siRNA)真核表达载体,观察其对骨质疏松( OP)大鼠的治疗作用。方法12周龄Wistar雌性大鼠随机分为5组,对照组、模型组、空载体组、DKK1-siRNA1组及DKK1-siRNA2组,每组10只。对照组肌注生理盐水,其他组肌注地塞米松造模,连续12 w,鉴定骨质疏松模型是否构建成功。构建两段DKK1-siRNA 真核表达载体,尾静脉注射治疗组大鼠,对照组和模型组注射等体积PBS,空载体组注射等体积空载体。骨切片观察载体是否靶向到骨,RT-PCR检测股骨DKK1 mRNA的表达,免疫组化法检测股骨DKK1蛋白的表达水平。 ELISA检测血清中骨碱性磷酸酶( BALP )、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的水平;测定股骨骨密度及病理结构变化。结果(1)双酶切和基因测序鉴定结果表明siRNA真核表达载体构建成功;(2)模型组、空载体组及治疗组大鼠造模后,近端股骨骨密度较对照组明显降低(P<0.05);病理改变为骨小梁数目明显减少、断裂,而对照组骨小梁结构较完整;(3)DKK1-siRNA质粒载体靶向到骨;(4)治疗组大鼠血DKK1-mRNA及股骨DKK1蛋白的表达明显下降;(5)与模型组和空载体组相比,治疗组血清中BALP与Col-Ⅰ水平明显升高, TRAP水平明显下降( P<0.05);(6)治疗后各组大鼠近端股骨骨密度的差异无统计学意义( P>0.05);(7)治疗组大鼠股骨有新生骨小梁形成,骨小梁破坏减轻。结论 DKK1-siRNA促进骨形成,抑制骨吸收,减轻骨结构的破坏。

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作者: 刘媛 [1] 剧锦哲 [1] 张伟 [1] 庞春艳 [1] 武剑 [1] 吕凤凤 [1] 王永福 [1]
期刊: 《中国骨质疏松杂志》2015年2期 125-131,151页 ISTICPKUCSCD
分类号: R593.9
DOI: 10.3969/j.issn.1006-7108.2015.02.001
发布时间: 2015-03-30
基金项目:
内蒙古自治区自然科学基金项目(2012MS1106) 内蒙古自治区高等学校科学研究项目
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