换一批A型流感病毒通用型人源化抗体的构建及初步鉴定
Preliminary construction and identification of humanized antibodies against a broad range of influenza viruses
摘要目的 制备A型流感病毒通用型人源化抗体并进行鉴定. 方法 通过文献检索、蛋白质序列数据库(Swissprot)、蛋白质结构数据库(PBD)等获得抗流感抗体的序列信息,经计算机分析软件InsightⅡ分析抗体结构,采用分子模拟、分子对接等方法分析抗体的轻、重链可变区基因结构,用昆虫细胞偏嗜密码子优化氨基酸序列,合成抗流感病毒抗体轻、重链可变区基因;对合成氨基酸序列中的轻、重链可变区基因作酶切鉴定,将轻链可变区基因与杆状病毒表达载体PAC-κ-CH3连接,构建PAC-κ-L-CH3,酶切合成的重链可变区基因与PAC-κ-L-CH3连接,构建PAC-κ-L-H-CH3重组表达载体,鉴定正确后,同杆状病毒DNA共转染至昆虫细胞(sf9)中,于27℃用无血清培养基培养,收集上清,应用各亚型流感病毒株灭活后进行血凝抑制试验和ELISA试验,检测制备的抗体对流感病毒的通用性;通过荧光抗体试验检测抗体在细胞中的表达. 结果 重组杆状病毒表达载体转染sf细胞后,传代上清中检测到抗体;血凝抑制试效价为1∶2;ELISA结果显示有3株制备的抗体对3种流感病毒呈阳性反应,1株对实验用的流感病毒株没有反应;转染后传代细胞的荧光抗体鉴定结果显示有阳性抗体表达. 结论 成功采用计算机筛选合成抗流感病毒抗体基因,初步获得A型流感病毒通用型抗体.
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DOI
10.13350/j.cjpb.140601
发布时间
2014-08-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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