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不同冻存液对人诱导性多能干细胞冻存与复苏效果的影响

Comparison of the Effects of Different Cryoprotectants on Cryopreservation and Resuscitation of Human Induced Pluripotent Stem Cells

摘要:

目的:探讨不同冻存液对人诱导性多能干细胞(iPSC)冻存复苏后的存活率及诱导分化的影响,筛选出简单有效的冻存与复苏方法.方法:人iPSC培养至第3代后分组冻存:①含有不同配比胎牛血清(FBS)的细胞冻存液分组:A组[80%培养基(DMEM/F 12)+10%FBS+10%二甲亚砜(DMSO)];B组(70%DMEM/F12+20% FBS+10% DMSO);C组(40%DMEM/F 12+50%FBS+ 10%DMSO);D组(90%FBS+10%DMSO).②含有不同配比DMSO的细胞冻存液分组:E组(45%DMEM/F12+50%FBS+5%DMSO);F组(40%DMEM/F 12+50%FBS+10%DMSO);G组(35%DMEM/F12+50%FBS+1 5%DMSO);H组(30%DMEM/F 12+50%FBS+20% DMSO).以相同方法冻存并复苏人iPSC,观察比较不同组细胞在复苏14d后重新形成典型干细胞集落的数量,并在相同诱导分化体系下,记录复苏人iPSC向神经元和胶质细胞分化的效率.结果:C和F组细胞复苏后形成典型干细胞集落的数量多于其他组(P<0.05),A和B组细胞复苏后分化为神经元的效率略高于其他实验组.结论:以40%DMEM/F12+50%FBS+10%DMSO配比组合成的细胞冻存液作为人iPSC的冻存保护剂,可使人iPSC的冻存复苏效率最优并保持较好的生物学特性.

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