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新型阳离子聚合物非病毒载体介导野生型p53基因体外转染效果的研究

Study on effects of novel cationic polymer nonviral vector-mediated wild-type p53 gene transfection in vitro

摘要:

目的:研究新型阳离子聚合物非病毒载体——尿刊酸修饰的壳聚糖(UAC)介导野生型p53(wt-p53)基因体外转染人肝癌细胞系HepG2的效果.方法:载体UAC包裹含绿色荧光蛋白(GFP)报告基因和wt-p53治疗基因的质粒(pEGFP-p53)转染HepG2细胞,利用流式细胞术和荧光显微术检测细胞内GFP的表达,优选最佳转染条件;采用RT-PCR法检测细胞内p53mRNA的表达,流式细胞术评价基因转染对细胞周期的影响,Western blot法检测细胞内p53及其下游细胞周期调控蛋白的表达.结果:在低pH(pH=6.9)条件下,采用低壳聚糖分子量(20000)的UAC作为载体,与pEGFP-p53形成高N/P(N/P=30)的UAC/ pEGFP-p53复合物转染HepG2细胞,可获得最佳转染效果;载体UAC介导wt-p53基因转染细胞后,p53 mRNA表达水平明显上调,G0/G1期出现显著阻滞,p53、p21和Rb蛋白表达水平明显上调,cyclin D1和CDK4蛋白表达水平明显下调.结论:载体UAC可成功介导wt-p53基因转染HepG2细胞,并诱导其产生细胞周期阻滞.

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作者: 王伟 [1] 王玉 [2] 王若宁 [1] 徐苏颖 [1] 丁杨 [1] 周建平 [1]
作者单位: 中国药科大学药剂学教研室,天然药物活性物质与功能国家重点实验室,南京210009 [1] 南京医科大学药理学系,南京210029,江苏 [2]
分类号: R965.2
栏目名称: 基础研究
发布时间: 2012-03-20
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