微型双功能抗体抗CD3/抗CD20的构建和表达
Study on the construction and expression of anti-CD3/anti-CD20 Diabody
目的:构建和表达抗CD3/抗CD20微型双功能抗体,并测定该微型双功能抗体的生物学活性。方法:采用PCR和overlap PCR方法构建抗CD3/抗CD20微型双功能抗体,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用亲和层析法纯化该产物,并用Western blot和分子排阻层析鉴定纯化产物;采用FACS法和玫瑰花环试验鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性。结果:DNA序列测定结果表明:抗CD3/抗CD20微型双功能抗体已构建成功,表达可溶性产物的产量达1 mg/ml以上,纯化产物中二聚体的比例达90%,具有与Jurkat(CD3+)和Daudi细胞(CD20+)结合的活性,且能同时与Jurkat和Daudi细胞结合形成玫瑰花环。结论:利用Diabody形式,首次成功地构建了抗CD3/抗CD20微型双功能抗体,并获得较高表达,表达产物具有与相应2个靶抗原结合的活性。
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