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MicroRNA-203抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移的机制研究

Mechanism of microRNA-203 inhibiting proliferation and migration of osteosarcoma cells

摘要:

目的 探讨microRNA-203(miR-203)对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响及机制.方法 通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定miR-203在正常成骨细胞hFOB及骨肉瘤细胞系中的表达,将MG-63细胞系分成miR-203组、Scramble组、RAB22A组、NC组,Lipofectamine 2000分别转染miR-203 mimics、Scrambles、pcDNA3.1-RAB22A、空白对照质粒;通过噻唑蓝(MTT)实验测定增殖能力,细胞划痕实验测定迁移能力;通过Target Scan和双荧光素酶实验预测及验证miR-203与RAB22A基因的靶向调节关系;RT-PCR测定RAB22A mRNA表达水平;Western blot测定E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平.结果 miR-203在骨肉瘤细胞系SAOS-2、SOSP-9607、U2OS及MG-63中较hFOB细胞系表达降低.MTT显示,在培养48和72 h后,miR-203组相对细胞数少于Scramble组(P<0.05);培养24 h后,Scramble组细胞相对划痕面积小于miR-203组(P<0.05);双荧光素酶实验示,miR-203与RAB22A基因存在靶向调节关系.RAB22A组相对划痕面积小于NC组(P<0.05);MTT显示,在培养24、48和72 h后,RAB22A组相对细胞数多于NC组(P<0.05);RAB22A组与NC组比较,E-cadherin下调表达,N-cadherin上调表达,Vimentin上调表达.结论 miR-203通过下调RAB22A基因表达,抑制上皮间质转化,进而抑制骨肉瘤细胞增殖与迁移.

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