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细粒棘球绦虫组织蛋白酶B的重组表达及生物信息学分析

Cloning,expression and bioinformatics analysis of cathepsin B of Echino-coccusgranulosus

摘要:

目的:克隆、表达细粒棘球绦虫组织蛋白酶B(EgCatB)基因,并对其进行生物信息学预测和分析。方法提取细粒棘球绦虫总RNA反转录成cDNA,以此为模板扩增目的基因。利用无缝克隆技术和麦胚无细胞表达体系克隆表达EgCatB,用免疫印迹实验进行验证。采用SignalP 4.1、TMHMM sever v.2.0、TargetP 1.1对EgCatB编码蛋白分别进行信号肽、跨膜区及亚细胞定位的预测。采用BLASTP和GeneDoc进行EgCatB同源序列比对及保守位点分析。采用ProtParam、SMART、Predictprotein、Swiss?model分析EgCatB编码蛋白的结构。采用NetOGlyc 4.0 Server和NetNGlyc 1.0 Server在线分析EgCatB蛋白O型和N型糖基化位点。结果成功构建了重组质粒pEU?EgCatB。蛋白电泳和免疫印迹实验结果显示该基因获得了可溶性表达。经生物信息学分析预测该蛋白分子量35.9 kDa、理论等电点6.37,为含信号肽的分泌蛋白,酶活性位点高度保守,并通过Gln106、Cys112、His282和Asn302形成了催化中心。EgCatB基因所编码蛋白氨基酸序列中不存在N?糖基化位点,但存在9个O?糖基化位点。结论成功克隆表达了细粒棘球绦虫EgCatB基因并对其进行了较全面的生物信息学预测分析,为该蛋白的功能研究提供了参考依据。

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