腺病毒介导的白介素-24转移对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡和周期调节蛋白p21、p27及CyclinE的影响
Effects of adenovirus mediated IL-24 gene transfer on apoptosis and cell cycle regulatory protein p21,p27 and CyclinE of rat gomerular mesangial cells induced by lipopolysaccharide
摘要目的:探讨腺病毒介导的IL-24转移对脂多糖( LpS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞( GMCs)和细胞周期调节蛋白p21、p27及CyclinE的影响。方法采用10%FBS/DMEM培养293细胞,扩增腺病毒载体,GMCs培养4~6代细胞后用于分析。①观察IL-24对LpS诱导的GMCs凋亡影响:分为对照组、Ad. IL-24组、LpS组和LpS+ Ad. IL-24组,其中对照组和LpS组GMCs不转染携带IL-24腺病毒( Ad. IL-24),Ad. IL-24组和LpS+Ad. IL-24组以Ad. IL-24转染 GMCs,LpS组和LpS+Ad. IL-24组加LpS培养,以流式细胞术检测培养后24和48 h的GMCs凋亡率;②考察IL-24对GMCs周期蛋白影响:对照组为5%FBS/DMEM培养GMCs,Ad-GFp组采用携带绿色荧光蛋白的对照载体( Ad. GFp)转染GMCs,Ad. IL-24+LpS组以Ad. IL-24转染GMCs,采用Western-blot检测p21、p27及CyclinE表达。结果①GMCs在培养后24和48 h细胞凋亡率:对照组分别为(0.86±0.15)%和(0.98±0.4)%;IL-24组分别为(1.02±0.22)%和(1.43±0.31)%;LpS组分别为(2.19±0.81)%和(2.49±0.12)%,LpS+Ad. IL-24组分别为(18.01±1.17)%、(26.82±5.01)%;2个观察时间点细胞凋亡率对照组与IL-24组差异无统计学意义,LpS组显著高于对照组( P<0.05),LpS+ Ad. IL-24组细胞凋亡率最高(P<0.05)。②Ad-GFp组p21、p27表达显著低于对照组(P<0.05),CyclinE表达显著高于对照组(P<0.05);Ad. IL-24+LpS组p21、p27表达较Ad-GFp组显著上调(P<0.05),CyclinE表达较Ad-GFp组下调。结论 IL-24腺病毒载体对正常GMCs无影响,但可使LpS诱导增生的 GMCs凋亡增加,其可能机制是上调关键细胞周期负调控蛋白 p21、p27及下调CyclinE。
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