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基因工程抗体抗CD19(Fab)-LDM的制备及生物学活性研究

Preparation of genetic engineering antibody anti-CD19(Fab)-LDM and its biological activity

摘要:

目的 构建及表达抗CD19(Fab)-LDP(LDP为LDM辅基蛋白)融合蛋白,制备强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM,进行体外生物活性的研究.方法 采用基因克隆技术,构建基因重组质粒pAZYanti-CD19(Fab)-LDP,测序进行鉴定,转化至大肠杆菌进行表达,表达产物经Protein G亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定;采用流式细胞检测技术(FACS)和激光共聚焦显微镜技术,检测融合蛋白与B淋巴瘤Raji细胞的结合活性;采用间接免疫荧光法,检测CD19介导细胞内化的情况;采用MTT法检测强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM对CD19+Raji细胞的靶向杀伤活性;采用彗星电泳的方法,检测强化融合蛋白对Raji细胞DNA的损伤程度.结果 用基因工程方法成功的构建、表达融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDP,Protein G亲和层析柱纯化后在SDS-PAGE上表现为相对分子质量约60 ku蛋白条带,且融合蛋白可与Raji细胞特异结合,并能介导细胞的内化;强化融合蛋白对Raji细胞具有较强的细胞毒性,并能引起细胞DNA损伤.结论 强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM可以靶向作用于B淋巴瘤细胞,并具有较强的抗肿瘤活性,在恶性B淋巴瘤生物治疗中具有潜在的应用价值.

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作者: 姜琳琳 [1] 张孝云 [1] 马莉 [1] 颜次慧 [1] 齐怀丰 [2] 熊冬生 [1] 范冬梅 [1]
作者单位: 中国医学科学院,中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室,天津,300020 [1] 天津红日金博达生物技术有限公司,天津,300457 [2]
期刊: 《中国药理学通报》2013年29卷10期 1363-1368页 ISTICPKUCSCDCABP
栏目名称: 论著
DOI: 10.3969/j.issn.1001-1978.2013.10.009
发布时间: 2013-11-07
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