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SHH 转染骨髓间充质干细胞心肌移植后成活与分化

Study on the survival and differentiation situation of SHH gene-transfected mesenchymal stem cells in myocardial transplanta-tion

摘要:

目的:探讨SHH基因转染骨髓间充质干细胞心肌移植后的成活和分化情况。方法采用密度梯度离心-贴壁培养法获得Wistar大鼠间充质干细胞( MSC);克隆SHH基因并构建pcDNA3.1-SHH真核表达质粒,用电转法将SHH基因转染入MSC中并体外证实转染SHH基因mRNA和蛋白在MSC中表达。结扎大鼠前降支建立心肌梗死模型,4周后在心肌梗死区移植150μl 3×106个转染SHH基因的骨髓间充质干细胞( BMMSC)。于移植后第1、2、4、8周取心肌梗死区心肌组织标本进行免疫组化和电镜检测移植后转染细胞的存活和分化情况。结果基因测序和双切酶(EcoR I,Bamh I)分别证实SHH基因克隆与PCDNA3.1-SHH重组真核表达载体构建成功。荧光定量PCR及Western-blot检测证实转染后MSC的SHH基因表达明显上升;免疫组化证实移植后1~8周心肌内均有干细胞存活,第4、8周电镜可见移植干细胞向心肌细胞方向分化。结论SHH基因转染骨髓间充质干细胞后外源性基因表达明显增高,转染SHH基因的骨髓间充质干细胞能够在移植受体心脏内较好的存活并分化。为缺血性心脏病的转基因细胞治疗进一步研究提供实验依据。

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