换一批FRNK质粒转染抑制肝星状细胞增殖机制研究
FAK-RELATED NON-KINASE PLASMID TRANSFECTION INHIBITED HEPATIC STELLATE CELLS PROLIFERATION
摘要目的:探讨黏着斑激酶相关非激酶(FRNK)质粒瞬时转染肝星状细胞(HSC),对纤维连接蛋白(FN)刺激的HSC增殖的影响及其机制.方法:应用体外细胞培养技术,脂质体介导法进行FRNK质粒转染;Western blot 技术检测FRNK、黏着斑激酶(FAK)、p-FAK(Tyr397)蛋白的表达情况,鉴定转染效果;改良MTT法测定HSC增殖;流式细胞术(FCM)检测细胞周期时相.结果:FRNK质粒转染HSC 48 h时,FRNK蛋白表达最强(P＜0.01);FAK蛋白转染前后无明显差异(P＞0.01);FRNK质粒组p-FAK(Tyr397)蛋白含量(0.40±0.14)较空质粒组(1.89±0.25)显著下降(P＜0.01);FRNK在HSC大量表达后,于转染12 h、24 h、48 h的HSC增殖抑制率分别为20.07%、26.16%和29.77%(P＜0.01),呈时间依赖性关系;FRNK质粒组G0/G1期细胞数(71.4±2.81)较空质粒组(48.9±1.66)明显增加(P＜0.01).结论:脂质体介导下FRNK质粒转染,可使外源性FRNK在HSC内大量表达,抑制FAK磷酸化,阻滞HSC周期时相于G0/G1期,抑制HSC增殖.
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