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同一组织来源的肝癌干细胞分化能力异质性的体外研究

Differentiation heterogeneity of liver cancer stem cells derived from the same cancer tissue in vitro

摘要:

目的通过比较肝癌干细胞的不同单细胞克隆的体外分化能力,分析同一组织来源的肿瘤干细胞分化能力是否具有异质性,以进一步明确肿瘤干细胞的分化特性,为靶向肿瘤干细胞的治疗提供实验依据。<br>  方法通过有限稀释法对肝癌干细胞进行单细胞克隆培养,获得的单细胞克隆通过 MTT 测定比较其增殖能力。然后分别挑选增殖速度较快和较慢的3个克隆,采用 RT-PCR 方法比较其干细胞标志物表达水平。对干细胞标志表达水平高的3个克隆(A2、A3和 B2)进行向成骨、软骨和脂肪方向的诱导分化。采用实时荧光定量 PCR 方法检测诱导前后成骨、软骨和脂肪标志分子的表达。<br>  结果获得的20个单细胞克隆增殖能力不同,并且增殖能力快的克隆表达干细胞标志物 CD133、Oct4、c-kit、SCF、nestin 比增殖能力慢的克隆强。向成骨方向诱导后,A2、A3和 B2克隆 I 型胶原 mRNA 表达水平分别升高了(4.71±0.11)、(2.13±0.15)和(3.82±0.3)倍;骨钙素mRNA 的表达水平分别升高(8.55±0.18)、(7.02±0.03)和(7.91±0.09)倍,说明 A2克隆向成骨细胞分化能力最强。向软骨方向诱导后,B2分化能力最强,软骨标志分子蛋白聚糖和 II 型胶原的表达分别上调(25.01±0.19)倍和(17.49±0.19)倍,而在 A2未发生明显变化,A3只轻微上调。向脂肪方向诱导后, A2、A3和 B2克隆脂联素mRNA 表达水平分别升高了(6.12±0.15)、(11.45±0.36)和(12.41±1.03)倍,过氧化物酶体增殖物激活受体γmRNA 的表达水平分别升高(4.92±0.02)、(9.54±0.18)和(8.96±0.11)倍。<br>  结论来源于同一组织的肝癌干细胞在分化能力上具有异质性,这可能是导致肿瘤组织异质性的原因之一,也提示靶向肿瘤干细胞的治疗需要联合用药。

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