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miR-1271-5p在肾细胞癌组织和细胞中的表达及其对A-498细胞增殖及凋亡的影响

Expression of miR-1271-5p in renal cell carcinoma and its effect on proliferation and apoptosis ofA-498 cells

摘要:

目的:探讨miR-1271-5p在肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)组织和细胞系中的表达及其对RCC细胞株A-498增殖及凋亡的影响.方法:用实时荧光定量PCR(qPCR)检测手术切除并经病理确诊为RCC组织和癌旁组织,以及RCC细胞系ACHN、A498、HK-2、786-O、CaKi-1和人胚肾细胞株HEK293中miR-1271-5p的表达水平.用miR-1271-5p(实验组)和miR-NC(对照组)分别转染A-498细胞.通过生物信息学预测鸟嘌呤交换因子DOCK1为miR-1271-5p可能的靶基因,构建DOCK1基因的3'UTR野生型及突变体序列双荧光素酶报告基因载体并进行荧光素酶活性检测,qPCR检测两组细胞中DOCK1 mRNA表达水平,Western blotting检测两组细胞中DOCK1、p-ERK、p-AKT、Bcl-2和Bax蛋白的表达情况,MTS法、集落形成实验和流式细胞术检测A-489细胞增殖、集落形成数目和凋亡情况.结果:RCC组织和细胞系中miR-1271-5p表达水平显著低于癌旁组织和人胚肾HEK293细胞(均P<0.01).双荧光素酶报告基因系统结果显示DOCK1是miR-1271-5p的靶基因(P<0.01).与miR-NC组细胞相比,miR-1271-5p组A-498细胞中DOCK1 mRNA的表达水平显著下降(P<0.01);DOCK1、p-ERK、p-AKT、Bcl-2蛋白表达水平显著下调(P<0.05),Bax蛋白明显上调(P<0.05);A-498细胞增殖活力显著降低(P<0.01);集落形成数显著减少(P<0.05);细胞凋亡率显著增高(P<0.01).结论:RCC组织和细胞系中miR-1271-5p表达下调,通过干扰DOCK1基因表达能明显抑制A-489细胞的增殖及诱导其凋亡,miR-1271-5p可能成为未来RCC治疗的分子靶标.

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