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胃生长素对晚期糖基化终产物致人脐静脉内皮细胞损伤的影响

Effect of ghrelin on injury of human umbilical vein endothelial cells induced by advanced glycation end products

摘要:

目的 观察胃生长素对晚期糖基化终产物(AGE)致人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的影响.方法 体外分离及培养HUVEC细胞株,制备糖基化牛血清白蛋白(AGE-BSA).处理细胞时AGE-BSA终浓度为200 mg/L,胃生长素预作用时间为24h.将细胞分为无血清组、不同浓度胃生长素组(0.01,0.1,1和10 μmol/L)、AGE-BSA组和不同浓度胃生长素(0.01,0.1,1和10 μmol/L)+ AGE-BSA组,AGE-BSA处理48 h后采用噻唑蓝法检测细胞存活率;将细胞分无血清组、AGE-BSA组和不同浓度胃生长素(0.01,0.1,1和10 μmol/L)+ AGE-BSA组,AGE-BSA处理48 h后Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况;将细胞分为无血清组、AGE-BSA组和胃生长素(1μmol/L)+AGE-BSA组,AGE-BSA处理24 h后,电镜观察细胞超微结构变化;将细胞分为无血清组、胃生长素组(1 μmol/L),AGE-BSA组和胃生长素(1μmol/L)+AGE-BSA组,检测细胞内活性氧簇(ROS)水平.结果 不同浓度胃生长素组中,胃生长素剂量依赖性促进细胞增殖,0.1,1和10 μmol/L胃生长素组与无血清组细胞存活率比较差异均有统计学意义[(109±18)%、(113±15)%、(115±14)%比(100±11)%,P<0.05];胃生长素预处理抑制AGE-BSA所致HUVEC存活率下降,呈剂量依赖性,1和10 μmol/L胃生长素+AGE-BSA组与AGE-BSA组比较差异有统计学意义[(87±18)%、(97±19)%比(45±10)%,P<0.05].胃生长素剂量依赖性抑制AGE-BSA所致细胞凋亡,0.1,1和10 μmol/L胃生长素+AGE-BSA组细胞凋亡数量与AGE-BSA组比较差异有统计学意义[(14.7±9.5)%、(5.2±1.9)%、(4.5±2.1)%比(19.4±5.3)%,P<0.05].电镜下见AGE-BSA组凋亡细胞数量增多,细胞核呈致密浓染,或呈碎块状,线粒体呈絮状变;胃生长素+ AGE-BSA组细胞凋亡明显减轻.无血清组、胃生长素组、AGE-BSA组和胃生长素+AGE-BSA组ROS水平分别为(1.00±0.10)、(0.75±0.07)、(1.50±0.17)、(1.10±0.14),其中胃生长素组低于无血清组(P<0.05),AGE-BSA组明显高于无血清组(P<0.01),胃生长素+ AGE-BSA组明显低于AGE-BSA组(P<0.01).结论 胃生长素能抑制AGE诱导脐静脉内皮细胞凋亡及ROS的增加.

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