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人类GAD67基因扩增及pEGFP-C2-GAD67真核表达载体的构建

Amplification of human GAD67 gene and construction of its eukaryotic expression vector pEGFPC2-GAD67

摘要:

目的 扩增人类谷氨酸脱羧酶(GAD)67基因,并构建pEGFP-C2-GAD67真核表达载体.方法 应用基因重组技术,采用反转录PCR方法对来自人类脑组织cDNA中编码GAD67的基因片段进行扩增,插入PUC57克隆载体,经Xho Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切出GAD67基因片段,再克隆入真核表达载体pEGFP-C2后构建pEGFP-C2-GAD67重组载体,经PCR扩增、酶切后测序鉴定. 结果 人类GAD67基因扩增产物大小为1 785 bp,编码594个氨基酸残基.重组真核表达载体经酶切鉴定表明为正确重组子,PCR正确扩增出目的条带.与GenBank中人类GAD67基因序列比较,核苷酸和氨基酸水平的同源性分别达99.78%和99.66%. 结论 人类GAD67基因克隆后,可成功构建真核表达载体pEGFP-C2-GAD67,为进一步该基因转染神经干细胞移植治疗癫痫提供了实验基础.

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