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Ⅱ型神经纤维瘤基因突变型的构建及生物学功能研究

Construction and characterization of mutants in the neurofibromatosis type 2 tumor suppressor gene

摘要:

目的 构建Ⅱ型神经纤维瘤(NF2)抑癌基因546位点突变的真核表达载体,并在大鼠神经鞘瘤细胞(RT4)中诱导表达.方法 用定点突变法将pEGFP-N1-NF2第546位异亮氨酸(Ⅱe)突变为蛋氨酸(Met)从而构建NF2突变子pEGFP-N1-NF2~(△Ⅱe546Met),经酶切和测序鉴定后用脂质体法将其转染至RT4细胞,同时设pEGFP-N1-NF2转染组做为对照,Westem blot法检测细胞pEGFP-NF2蛋白的表达,MTT法检测转染后细胞的增殖情况. 结果 酶切测序证实定点突变成功,Western blot结果显示RT4细胞能表达pEGFP-NF2蛋白,pEGFP-N1-NF2~(△Ⅱe546Met)转染组RT4细胞抑制率低于pEGFP-N1-NF2转染组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 成功构建了1个能够在RT4细胞中表达的单个点突变的NF2基因真核表达载体.

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