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酸性肿瘤微环境对胶质瘤细胞侵袭 迁移能力的影响及其机制研究

Effect of acidic tumor microenvironment on invasion and migration and its mechanism in glioma cells

摘要:

目的 探讨酸性肿瘤微环境对胶质瘤细胞侵袭迁移能力的影响及其机制.方法 (1)采用酸碱滴定法调节培养基pH值,分别用pH值为6.4、7.4的培养基(酸性组、正常组)培养人胶质瘤细胞U87、U251,培养3d后采用Western blotting检测细胞缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)、CD44蛋白的表达.采用Transwell实验检测细胞的迁移、侵袭能力,采用免疫荧光染色检测细胞CD44的表达.(2)分别取U87、U251细胞,分为小干扰RNA(siRNA)无义序列组、siRNA-CD44-1组,分别经Lipofectin-3000介导转染siRNA无义序列、siRNA-CD44-1干扰片段,转染后3d采用Transwell实验检测2组细胞的迁移、侵袭能力.(3)取U87、U251细胞,分为酸性组(用pH值为6.4的培养基培养)、空白对照组、siRNA无义序列组、siRNA-CD44-1组、siRNA-CD44-2组,后4组细胞均用pH值为7.4的培养基培养.培养4 d后,siRNA无义序列组、siRNA-CD44-1组、siRNA-CD44-2组细胞分别转染siRNA无义序列 、siRNA-CD44-1干扰片段 、siRNA-CD44-2干扰片段.转染后3 d采用Western blotting检测5组细胞CD44、N型钙黏素(N-Ca)、波形蛋白及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白的表达.结果 (1)Western blotting检测显示:与正常组比较,酸性组U87、U251细胞HIF-2α、CD44蛋白的表达量明显增高.Transwell迁移和侵袭实验均显示酸性组穿膜细胞数明显多于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05).免疫荧光染色显示,酸性组细胞CD44的表达明显多于正常组.(2)Transwell迁移和侵袭实验均显示siRNA-CD44-1组穿膜细胞数明显少于siRNA无义序列组,差异均有统计学意义(P<0.05).(3)Western blotting检测显示:与酸性组比较,空白对照组、siRNA无义序列组、siRNA-CD44-1组、siRNA-CD44-2组U87、U251细胞CD44、N-Ca、 波形蛋白、MMP-2的表达量降低.与siRNA无义序列组相比,siRNA-CD44-1组、siRNA-CD44-2组U87、U251细胞CD44、N-Ca、 波形蛋白、MMP-2蛋白的表达量明显降低.结论 酸性肿瘤微环境可通过提高CD44的表达来提高胶质瘤细胞的侵袭、迁移能力.

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作者: 解杨 [1] 童鹿青 [1] 易立 [1] 刘沛东 [1] 李佳博 [1] 张亮 [1] 王旭亚 [1] 白宇 [1] 杨学军 [1]
期刊: 《中华神经医学杂志》2019年18卷3期 217-224页 ISTICPKUCSCDCA
栏目名称: 神经胶质瘤
DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-8925.2019.03.001
发布时间: 2019-04-17
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