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介导RNAi的tRNAVal启动子质粒载体的建立

Construction of a tRNAVal promoter plasmid expressing shRNAs in mammalian cells which mediates RNA interference

摘要:

目的构建以tRNAVal启动子控制shRNA转录引发RNAi的质粒载体. 方法从人基因组中用PCR方法扩增出tRNAVal基因片段,人工突变去除3′末端数个碱基,连以Linker序列,用此经过改造的tRNAVal启动子,构建控制针对荧光素酶的shRNA转录载体pUC-tRNAVallucRi,与pMAMneoLuc共转染BHK-21细胞,观察对荧光素酶表达的影响.结果 pUC-tRNAVallucRi可以高效特异性抑制pMAMneoLuc中荧光素酶的表达,效率达97.1%~99.5%.结论 tRNAVal启动子载体可以高效转录shRNA,引发哺乳动物细胞RNAi现象.

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