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Zeste基因增强子同源物2及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白在胃癌细胞衰老过程中的作用及其机制

The influence and the mechanism of enhancer of zeste homolog 2 and mammalian target of rapamycin in senescence of human gastric cancer cell line AGS

摘要:

目的 探讨zeste基因增强子同源物2(EZH2)及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在胃癌AGS细胞衰老过程中的作用及其相关的机制.方法 胃癌AGS细胞,慢病毒转染沉默EZH2基因,衰老相关性β半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色,计数细胞异染色质位点(SAHF)数目,计数细胞核增殖抗原(Ki-67)检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot检测p21和p53表达水平.结果 沉默EZH2后,胃癌细胞SA-β-gal染色阳性率及SAHF阳性细胞百分比增加,SA-β-gal染色阳性率从(4.83±0.71)%增加至(35.22±2.67)%,而SAHF阳性细胞百分比从(5.20±1.48)%增加至(25.68±2.53)%;流式细胞检测显示细胞周期阻滞在G0/G1期,对照组为(41.20±3.70)%,沉默EZH2后增加至(57.60±2.97)%;p21和p53表达水平明显上调,其mRNA相对表达水平分别为对照组的(2.18±0.29)倍及(3.06 ±0.28)倍.加入mTOR抑制剂雷帕霉素处理EZH2沉默细胞,可见SA-β-gal染色阳性率及SAHF阳性细胞所占百分比明显下降,分别由(40.06±3.89)%降至(26.44±3.82)%和(32.38±3.89)%降至(20.48±3.44)%;流式细胞计数提示G0/G1期、S期和GJM期细胞百分比均发生显著变化,G0/G1期细胞百分比分别为(27.15±3.16)%和(56.03±5.29)%,S期细胞百分比分别为(50.63±2.97)%和(32.25±3.35)%,而G2/M期细胞百分比分别为(44.28±3.16)%和(28.37±3.17)%.结论 沉默EZH2能够通过调控p53、p21蛋白促进胃癌细胞衰老,细胞周期相关蛋白引起周期停滞后,需要mTOR相关信号通路驱动衰老转化.

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