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基质金属蛋白酶-9调控CD73自视网膜色素上皮细胞膜表面脱落机制的初步研究

Matrix metalloproteinase-9 regulates the shedding of CD73 from retinal pigment epithelium

摘要:

目的 探讨基质金属蛋白酶(MMP)-9调控CD73自视网膜色素上皮(RPE)细胞膜表面脱落的机制.方法 以脂多糖及肿瘤坏死因子-α共同干预体外培养的人RPE细胞,诱导RPE细胞膜表面CD73脱落.同时给予磷脂酶C(PLC)抑制剂ET-18-OCH330.0μmol/L或广谱MMP抑制剂ONO-48175.0μmol/L进行干预;流式细胞仪检测RPE细胞膜表面CD73含量变化.以选择性MMP-2、MMP-9抑制剂或相应siRNA进行干预;利用基因定点突变技术改造CD73中潜在的MMP-9识别位点,在CD73-/-RPE细胞中过表达野生型(Wt)及突变型(Mut)CD73,检测Wt、Mut-CD73脱落情况.结果 广谱MMP抑制剂可有效抑制CD73自RPE细胞膜表面脱落;PLC抑制剂不能抑制CD73自RPE细胞膜表面脱落.选择性抑制MMP-9活性或以siRNA下调MMP-9的表达也均可抑制CD73自RPE细胞膜表面脱落.表达于CD73-/-RPE细胞膜表面的Wt-CD73可发生脱落,而Lys547-Phe548编码位点突变的CD73未见脱落.结论 MMP-9通过水解Lys547-Phe548位点而参与炎症状态下CD73自RPE细胞膜表面的脱落.

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