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重组人骨形态发生蛋白7对人尿道瘢痕成纤维细胞增殖及细胞外基质分泌的影响

Recombinant human bone morphogenetic protein 7 inhibits the proliferation and extracellular matrix secretion of fibroblast of urethral scars

摘要:

目的 研究重组人骨形态发生蛋白7 (rhBMP-7)对尿道瘢痕成纤维细胞增殖、细胞外基质分泌的影响.方法 用不同浓度的rhBMP-7处理由尿道瘢痕提取并培养至第4代的成纤维细胞;采用CCK-8法测定细胞增殖速率,并用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测各组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原蛋白(COL-1) mRNA的变化;使用Western印迹测定α-SMA的表达及rhBMP-7对成纤维细胞信号通路的影响.结果 同一时间点,随着rhBMP-7浓度增加,尿道瘢痕成纤维细胞增殖速率下降;高于20 ng/ml的rhBMP-7处理的成纤维细胞时,COL-1及α-SMA的mRNA显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),并呈现剂量依赖性.Western印迹实验表明rhBMP-7能抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)介导的p-smad2/3和a-SMA的过表达.结论 rhBMP-7通过调节TGF-β1信号通路,可抑制尿道瘢痕成纤维细胞增殖及COL-1、α-SMA基因表达.

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abstracts:

Objective To study the effect and its mechanism of recombinant human bone morphogenetic protein 7 (rhBMP-7) on urethral keloid fibroblast.Methods Urethral fibroblasts were extracted and cultured,and the fourth-generation fibroblasts were used for experiment.Urethral fibroblasts were treated with rhBMP-7.Proliferation rate was detected by CCK-8 method.RT-PCR was applied to test changes of mRNA in α smooth muscle actin (α-SMA) and type Ⅰ collagen protein (COL-1) of each group.Western blot was used to measure α-SMA protein expression and the effect of rhBMP-7 on signaling pathway of urethral keloid fibroblasts.Results With the increase of rhBMP-7 concentrations,the proliferation rate of urethral keloid fibroblast was generally decreased.Cells kept proliferating with time at the same concentration of rhBMP-7,mRNA level of COL-1 and α-SMA in rhBMP-7-treated (> 20 ng/ml) urethral keloid fibroblasts was greatly reduced with statistical significance (P < 0.05) and dose dependency.It was found rhBMP-7 inhibited the overexpression of p-smad2/3 and α-SMA mediated by transforming growth factor beta 1 (TGF-β1) signaling pathway.Conclusion rhBMP-7 could adjust TGF-β1 signaling pathway to inhibit gene expression of COL-1 and a-SMA in urethral keloid fibroblast,which provided evidences for further animal experiments or clinical trials.

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