反相高效液相色谱法测定肾病综合征患儿外周血单个核细胞内地塞米松浓度-论文-万方医学网

反相高效液相色谱法测定肾病综合征患儿外周血单个核细胞内地塞米松浓度

RP-HPLC determination of dexamethasone in peripheral blood mononuclear cells in children with nephrotic syndrome

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摘要：

目的应用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定不同糖皮质激素反应肾病综合征患儿外周血单个核细胞内地塞米松浓度,为肾病综合征(NS)患儿糖皮质激素(GC)耐药的研究奠定基础.方法 24名初发未应用GC的NS患儿分为GC敏感组(SSNS)与GC耐药组(SRNS),提取外周血单个核细胞后加入不同浓度地塞米松(Dex),培养后在0、12、24、36 h不同时间点收获细胞,应用乙酸乙酯萃取,流动相为乙腈-10 mmol·L-1磷酸二氢钠溶液(51 ∶ 49,加适量0.1%三氟乙酸),进样50μL检测,色谱柱C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流速1mL·min-1,丙磺舒为内标,紫外检测波长254 nm.结果 Dex浓度在16.365～61.820μg·mL-1线性关系良好,最低检测限8μg·mL-1;平均回收率为91.4%,日间精密度＜10%,SSNS患儿不同时间点细胞内Dex浓度有显著差异,一定范围内细胞内Dex浓度逐渐升高(P＜0.05);而SRNS患儿不同时间点细胞内Dex浓度无显著性差异(P＞0.05).结论 RP-HPLC法能敏感、快速、准确地测定NS患儿单个核细胞Dex浓度,一定范围内不同浓度GC反应NS患儿不同时间点外周血单个核细胞内Dex浓度,可能与GC反应差异性相关,不同GC反应NS患儿细胞内Dex浓度测定为临床GC耐药机制的研究奠定了基础.