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摘要苍术为菊科植物茅苍术Atractylodeslancea(Thunb.)DC.或北苍术Atractylodeschinensis(DC.)Koidz.的干燥根茎，为传统大宗中药材，具有健脾燥湿、祛风散寒、明目之功效。近年来，随着苍术市场需求量逐年上涨，苍术野生资源日益枯竭，正品苍术的供应量难以满足市场需求，造成苍术市场种源混乱、混伪品不断、药材质量难以保证，严重影响了苍术临床用药的安全有效。因此，对中药材苍术来源的准确鉴定和药材质量的有效评价具有重要意义。<br>　　目的：<br>　　通过对苍术属五种药用植物（北苍术、茅苍术、关苍术、朝鲜苍术和白术）的原植物、种子及药用部位进行性状鉴别和DNA条形码鉴别，确定苍术属五种药用植物的鉴别特征；同时建立北苍术种子质量分级标准和苍术药材多种活性成分的检测方法，从根源上保证种源的准确和质量，为苍术药材及其混伪品的准确鉴别和药材的质量评价提供科学依据，保障苍术临床用药的安全性和有效性。<br>　　方法：<br>　　1.通过比较苍术属五种药用植物的根、茎、叶、花、果实等形态学特征对其进行鉴别研究；<br>　　2.通过观察和测量苍术属五种药用植物种子的形态、大小、颜色、表面纹饰等特征对其进行鉴别；<br>　　3.共收集苍术属种子样品39份，其中12份为来自基原植物的种子样品和27份为市售苍术属种子样品；通过DNA提取、聚合酶链式反应（PCR）和双向测序获得其ITS2和psbA-trnH序列；另自Genbank数据库下载苍术属物种的ITS/ITS2序列38条，丰富苍术种子DNA条形码参考数据库；基于构建邻接（NJ）系统发育树法对苍术属种子样品进行物种鉴定，探讨苍术种子DNA条形码技术鉴定的可行性；<br>　　4.依据《农作物种子检测规程》检测不同来源的北苍术种子净度、发芽率、含水量、生活力、千粒重等各项指标，利用SPSS22.0软件对获得的北苍术种子质量指标进行相关性分析、主成分分析、系统聚类分析及K-均值聚类分析，同时结合生产实际初步制定北苍术种子质量分级标准；<br>　　5.利用眼观、手摸、鼻闻、口尝等方法对已收集苍术药材的性状、大小、颜色、表面纹理、断面特征、质地、气味等指标进行观察和比较，明确其鉴别特征；<br>　　6.通过基地采集和野外采挖等途径收集苍术药材样品53份，获取其ITS2序列，并结合自Genbank数据库下载的38条苍术属物种ITS/ITS2序列，构建苍术DNA条形码数据库；另从市场购买苍术属药材及饮片54份，基于构建邻接（NJ）系统发育树法对市售药材进行物种鉴定；<br>　　7.采用高效液相色谱法建立苍术药材中（4E，6E，12E）-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯（TDDA）、苍术素、苍术酮含量的检测方法，并进行方法学考察；同时比较不同产地苍术药材特征性化学成分的差异。<br>　　结果：<br>　　1.苍术属五种药用植物的原植物形态相似，仅在根茎、叶片形态及分裂程度、花的颜色等方面存在差别；其中，白术地下根状茎为不规则团块状，中下部叶片常3~5羽状全裂，具长叶柄，花紫红色，其余四种花为白色；关苍术叶片形态与白术相似，根状茎多为结节状；朝鲜苍术叶片不分裂，基部半抱茎；北苍术的叶片分裂变化较大，上部叶片不分裂、羽状深裂或浅裂、或不规则分裂，茅苍术仅基部少数叶片3~5浅裂；此外，在北苍术不同居群中发现了29种不同类型的叶片形态和6种典型的原植物类群；<br>　　2.苍术属五种药用植物种子的外观形态特征相似，均为瘦果，倒卵圆形，表面密被白柔毛，顶端衣领环状，有冠毛，基部联合呈环，仅在颜色、冠毛长短、大小及千粒重方面存在差异。北苍术、茅苍术、关苍术和朝鲜苍术种子的颜色多为褐色，白术种子的颜色相对较浅，常为棕黄色；白术瘦果冠毛较长，其它4种瘦果冠毛较短；在大小和千粒重方面，从大到小的顺序依次为，白术＞朝鲜苍术＞北苍术＞关苍术＞茅苍术；<br>　　3.由于psbA-trnH序列在苍术属物种中鉴别效率较低，故后续分析采用ITS2序列进行；共获得经鉴定的苍术属种子样品ITS2序列12条，结合自Genbank获得的ITS2序列构建NJ系统发育树可对除北苍术和朝鲜苍术外的茅苍术、关苍术、白术种子进行有效区分；基于ITS2序列对市售苍术属种子样品进行鉴定，结果显示，14份市售北苍术种子中，9份种子的基原物种为白术，2份种子的基原物种为关苍术，3份种子的基原物种为北苍术/朝鲜苍术；10份市售茅苍术种子的基原物种均为白术；3份市售白术种子均为正品；<br>　　4.通过对北苍术种子质量指标的相关性分析、主成分分析、系统聚类分析及K-均值聚类分析，结合实际生产情况初步确定北苍术种子的质量分级标准：Ⅰ级（优）北苍术种子净度≥95%，发芽率≥88%，千粒质量≥10g，含水量≤10%；Ⅱ级（良）北苍术种子净度为88%~95%，发芽率60%~88%，千粒质量≥10g，含水量≤10%；Ⅲ级（不合格）北苍术种子净度＜88%，发芽率＜60%，千粒质量＜10g，含水量＞10%；<br>　　5.苍术属药材的区别主要表现为：白术，质地坚硬，气味、颜色与其余4种药材存在明显区别；北苍术多数为疙瘩块状，表面灰黑色，断面发黄，有“朱砂点”；茅苍术表面土灰色，断面黄白色，有“朱砂点”，且久放后析出白色絮状结晶；关苍术表面黑色，质轻、纤维性强，断面发白；朝鲜苍术表面黑色，断面空隙较多，质轻，为连珠状圆柱形，粗细较均匀；<br>　　6.获得经鉴定后的苍术属药材的ITS2序列53条；基于获得的苍术属物种ITS2序列构建NJ系统发育树，结果显示，除北苍术和朝鲜苍术合并聚为一支外，茅苍术、关苍术、白术可相互区分；而获得psbA-trnH序列由于缺乏足够的变异位点，无法满足物种鉴定需求，故后续分析采用ITS2序列进行；对市售苍术属药材样品的鉴定结果显示，47份市售苍术药材（包括市售北苍术、茅苍术和苍术）中，38份药材的基原物种为北/朝鲜苍术，4份药材的基原物种为茅苍术，5份药材的基原物种为关苍术；3份市售关苍术药材中，1份药材的基原物种为北/朝鲜苍术；4份市售白术药材中，1份药材的基原物种为北/朝鲜苍术；<br>　　7.建立了基于HPLC同时测定苍术药材中TDDA、苍术素和苍术酮含量的方法，采用Discovery?C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），以0.2%磷酸水（A）-乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱，检测波长为220nm（0~50min，检测苍术酮）、340nm（0~50min，检测TDDA和苍术素），流速为1.0mL·min-1，柱温为25℃，进样量为8μL；TDDA的线性范围在0.0065~0.262μg（R2=0.9999），平均加样回收率为100.0%，RSD为3.1%（n=9）；苍术素的线性范围在0.014~0.56μg（R2=0.9999），平均加样回收率为100.04%，RSD为2.8%（n=9）；苍术酮的线性范围在0.023~0.46μg（R2=0.9975），平均加样回收率为98.3%，RSD为4.1%（n=9）；整体而言，河北承德地区产的苍术药材含有较高的TDDA、苍术素，而东北地区产苍术药材的有效成分以苍术酮为主。<br>　　结论：<br>　　1.苍术属五种药用植物的原植物鉴别特征为：花色为第一鉴别依据，白术花色为紫红色，其它四种为白色；叶片是否分裂为第二依据，朝鲜<br>　　苍术叶片不分裂，其它三种叶片分裂；是否具有叶柄为第三依据，关苍术开白花，且下部叶片三裂或五裂，有叶柄，其它两种无叶柄；叶片分裂程度，茅苍术仅少数基部叶片有3~5浅裂，北苍术叶片分裂变化大；<br>　　2.以苍术属五种药用植物种子的颜色为鉴别指标，可将白术与北苍术、茅苍术、关苍术、朝鲜苍术的种子明显区分；基于ITS2序列构建NJ系统发育树可将除北苍术和朝鲜苍术外的茅苍术、关苍术和白术种子明显区分；鉴别发现，市售苍术种子市场存在混伪品；<br>　　3.不同来源的北苍术种子质量存在差异；以种子的净度、发芽率作为北苍术种子质量分级的主要指标，千粒重和含水量作为次要指标，可将北苍术种子质量分为3个等级，为北苍术种子的质量监控提供参考依据；<br>　　4.苍术属五种药用植物药用部位的鉴别特征：质地硬为白术；有朱砂点为北苍术和茅苍术，且茅苍术断面常有白色晶体析出；结合基于ITS2序列的DNA条形码技术可将北苍术、朝鲜苍术、茅苍术、关苍术和白术药材相互区分；鉴别发现，市售苍术药材存在混伪品；<br>　　5.建立了基于HPLC法的苍术药材中TDDA、苍术素和苍术酮的含量检测方法，该方法简便快捷，准确度高，可用于苍术药材的质量评价。检测结果表明，不同来源的苍术药材化学成分存在明显差异，且河北承德地区产的苍术药材含有较高的TDDA和苍术素，而东北地区产的苍术药材以苍术酮为主。