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摘要本课题基于2型糖尿病的中医病机“燥热内盛”及现代研究“炎症学说”的最新发展，把“燥热内盛”的中医理论与肥胖进一步发展成为胰岛素抵抗(IR)及2型糖尿病的研究相结合，提出肥胖的中医病机“燥热内盛”，采用“清热解毒”法治疗，达到降血糖、治疗2型糖尿病的目的。本研究选用临床常用的清热解毒药之一黄连的主要成分小檗碱(BBR)做为研究的代表药物，观察其对肥胖相关IR的影响。探讨IR相关2型糖尿病“燥热内盛”病机、“炎症学说”研究及“清热解毒”治法之间的联系，提出清热解毒方药的降糖机制。<br>　　目的：<br>　　通过高脂喂养C57BL/6lasc小鼠和培养RAW264.7巨噬细胞及诱导3T3-L1脂肪细胞，观察黄连的主要成分BBR对脂肪组织巨噬细胞浸润程度与肥胖相关胰岛素敏感性的影响。本课题研究了BBR降低肥胖小鼠体重、减少脂肪组织巨噬细胞浸润、改善IR的药理作用，丰富了中药单体减肥降糖的理论认识，对明确中医药降糖新作用有了进一步的认识。<br>　　方法：<br>　　体内实验:1）建立高脂喂养C57BL/6lasc小鼠，18周复制肥胖动物模型并评价胰岛素的敏感性指标，病理学采用HE染色法观察脂肪细胞大小并测量脂肪细胞直径，同时用小檗碱(BBR)，同时选取罗格列酮(RSG)作为阳性对照药干预15天进行药效研究。2）采用流式细胞仪分析脂肪组织巨噬细胞(ATMs)数量并用western bloting检测脂肪组织炎症信号通路及胰岛素信号通路，采用real time PCR检测脂肪组织MCP-1、IL-6、TNF-α的基因表达。3）ELISA法检测C57BL/6lasc小鼠血清的MCP-1含量。<br>　　体外实验:1）培养RAW264.7巨噬细胞及诱导3T3-L1脂肪细胞。用葡萄糖氧化酶法观察10umol/L小檗碱干预巨噬细胞调节液对脂肪细胞糖消耗情况。2）采用western bloting法检测炎症信号通路JNK(Thr183/185)、NF-κ B/P65、P-IKKβ(ser181)蛋白的磷酸化活化。3）采用trans well共培养系统，利用苏木精-伊红法对巨噬细胞进行染色，观察并统计3T3-L1脂肪细胞对RAW264.7巨噬细胞趋化数量，同时用ELISA法检测3T3-L1脂肪细胞上清MCP-1的含量。<br>　　结果：<br>　　1、以TNF-α为代表的细胞因子能够激活脂肪细胞JNK、IKKβ炎症信号通路，促进细胞因子IL-6、TNF-α及MCP-1的基因表达上调，增加Ser307蛋白磷酸化的活化，降低胰岛素的敏感性，使葡萄糖消耗下降。2、LPS促进JNK、IKKβ/NF-κB信号通路的活化磷酸化，使细胞因子IL-6、TNF-α及MCP-1基因表达上调，细胞表现为炎症状态。3、高脂饲料喂养18周的小鼠体重、血清MCP-1、FBG、FINS水平显著升高，HOMR指数＞1，胰岛素敏感性降低。4、小檗碱可以抑制JNK、IKKβ/NF-κB炎症信号通路，抑制IL-6、TNF-α炎症因子及趋化因子MCP-1的基因表达，同时抑制了ATMs的浸润数量，抑制丝氨酸307位点（Ser307）蛋白磷酸化的活化，恢复了胰岛素信号蛋白的活性和转导，改善胰岛素抵抗。<br>　　结论:小檗碱能够抑制脂肪组织巨噬细胞数量同时抑制炎症信号通路，改善胰岛素的敏感性。