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摘要目的:<br>　　本研究拟探讨miR-16对小鼠腹腔巨噬细胞M1/M2极化的调控作用及其对CD4+T细胞功能的影响，为抗肿瘤免疫治疗提供新的潜在干预靶点。<br>　　方法:<br>　　1.miR-16对小鼠腹腔巨噬细胞极化的调节作用<br>　　1.1 以100ng/ml IFN-γ及20 ng/ml LPS刺激C57BL/6小鼠腹腔来源巨噬细胞48h将其诱导成M1型巨噬细胞模型，以20 ng/ml IL-4刺激C57BL/6小鼠腹腔来源巨噬细胞48h将其诱导成M2型巨噬细胞模型。我们选取了CD16/32、IL-12和iNOS作为M1型巨噬细胞的标记物，CD206，Dectin-1和IL-10作为M2型巨噬细胞的标记物，利用流式细胞仪检测巨噬细胞CD16/32、CD206和Dectin-1的表达，ELISA法检测腹腔巨噬细胞培养上清中IL-10和IL-12的浓度，Griess法测定小鼠腹腔巨噬细胞iNOS的活性水平，以验证两型巨噬细胞的成功获得。<br>　　1.2 我们用慢病毒感染小鼠腹腔原代巨噬细胞和IL-4诱导形成的M2型巨噬细胞，使其过表达miR-16，分别用流式细胞仪检测腹腔巨噬细胞CD16/32、CD206和Dectin-1的表达，ELISA法检测腹腔巨噬细胞培养上清中IL-10和IL-12的分泌，Griess法测定腹腔巨噬细胞iNOS的活性水平，以探究miR-16对小鼠腹腔巨噬细胞的表型和功能的影响。<br>　　2.miR-16影响M2型巨噬细胞极化后对CD4+T细胞功能的影响及其可能机制<br>　　2.1 采用M2型巨噬细胞与CD4+T淋巴细胞体外共培养的方法，流式细胞术检测T细胞表面早期活化标志CD69的表达，ELISA检测细胞培养上清中IL-2和IFN-γ的分泌，以研究miR-16影响M2型巨噬细胞表型和功能后对CD4+T淋巴细胞功能的影响。<br>　　2.2 利用Mirbase、Targetscans、PicTar等基因预测软件查找miR-16可能的潜在靶基因，以探索miR-16影响M2型巨噬细胞极化的可能机制。<br>　　2.3 将慢病毒介导的miR-16导入IL-4诱导形成的M2型巨噬细胞使其过表达miR-16，利用Western Blot检测PD-L1蛋白的表达情况，以验证miR-16是否通过调控PD-L1蛋白的表达而影响腹腔巨噬细胞的极化。<br>　　结果:<br>　　1.体外实验表明，miR-16促进M1型巨噬细胞的极化，抑制M2型巨噬细胞的极化。<br>　　1.1 经IFN-γ和LPS处理的小鼠腹腔巨噬细胞CD16/32表达上调，IL-12产生明显增加，iNOS的活性水平增加，符合M1型巨噬细胞的特点;经IL-4处理的小鼠腹腔巨噬细胞CD206和Dectin-1表达上调，IL-10产生明显增加，符合M2型巨噬细胞特点。<br>　　1.2 慢病毒介导的miR-16感染小鼠腹腔原代巨噬细胞后，CD16/32表达增加，CD206和Dectin-1表达无明显变化，iNOS的活性水平增加，IL-12分泌增加，IL-10变化不明显，表现出类似M1型巨噬细胞的特点。<br>　　1.3 慢病毒介导的miR-16感染IL-4诱导形成的M2型巨噬细胞后，CD16/32表达上调，CD206，Dectin-1表达下调，iNOS的活性水平增加，IL-12产生增加，IL-10分泌降低，其特点倾向于M1型巨噬细胞。<br>　　2.miR-16抑制M2型巨噬细胞的表型和功能，进而促进CD4+T细胞的功能，其可能通过影响PD-L1蛋白的表达来实现。<br>　　2.1 在体外共培养体系中，与对照组相比，与过表达miR-16的M2型巨噬细胞组共培养的CD4+T细胞CD69表达增加，细胞因子IL-2和IFN-γ分泌增加，差异有统计学意义(P＜0.05)。<br>　　2.2 M2型巨噬细胞过表达miR-16后，PD-L1蛋白表达降低。<br>　　结论:<br>　　1.miR-16参与调控小鼠腹腔巨噬细胞的极化，促进M1型巨噬细胞极化，抑制M2型巨噬细胞极化。<br>　　2.miR-16可能通过调控PD-L1蛋白的表达从而抑制M2型巨噬细胞极化。