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摘要调节性T细胞（RegulatoryT cells，Treg）在维持机体免疫系统平衡中发挥重要作用。Treg可以消除自身反应性T细胞，诱导免疫耐受，减轻炎症。人体Treg缺陷表现为IPES综合征，即免疫失调，多内分泌病变，肠病以及X染色体性联遗传综合征。动物Treg缺陷表现为Scurfy综合征，即多系统自身免疫性疾病。Treg特异性分子标志是Foxp3，可分为胸腺来源的自然CD4+CD25+Foxp3+Treg(natural Treg，nTreg)和以及诱导型Treg(induced Treg，iTreg)，如Tr1，Th3等。Treg参与的维持机体耐受表现在各个方面，研究表明过继转移Treg可以治疗甚至阻止自身免疫性疾病的发生发展，动物模型试验也证实过继转移Treg阻止器官移植排斥和和造血干细胞移植引发的疾病。<br>　　炎症性肠病（Inflammatory Bowel Disease，IBD）是最常见的肠道免疫失衡导致的疾病之一，也称为克隆恩病和结肠炎，是由于肠道菌群失衡所继发的肠道免疫系统异常活化而导致的肠壁损害。由慢性炎症所继发的损害跟CD4+T细胞密切相关。相关的研究表明IBD主要由Th1和Th17细胞所驱动，炎症损害部位包涵高水平的Th1和Th17相关细胞因子，包括IFN-γ，IL-12，IL-17和IL-18等。Treg通过一系列机制调节自身反应性T细胞，包括分泌抑制性细胞因子IL-10，TGF-β1，分泌颗粒酶介导细胞溶解，通过免疫抑制相关分子ICOS，CTLA-4表达发挥免疫抑制作用等。不幸的是，从人外周血分选的nTreg并不能持续表达Foxp3，并且其免疫抑制功能也大大受损。现在不清楚IBD中过度活化的T细胞是Treg数量减少的结果，还是其功能潜在缺陷，效应T细胞抵抗其抑制作用，还是二者可能性兼并存在。有大量研究指出Treg的多样性，使其转化为效应细胞。粘膜组织的炎性微环境能够改变这些Treg的体内功能，在活化效应T细胞分泌的炎性细胞因子的存在下，Treg优先转向分化为Th17。因此Treg的稳定性对细胞治疗的潜在用途是十分重要的。<br>　　CD69是表达在慢性炎症部位的一个早期白细胞活化分子，由于目前其配体还未发现以及体内研究其生理作用的模型还不完善，CD69在免疫系统中确切作用还没有被阐明。以前的研究表明CD69是存在于不同白细胞亚群的活化分子，近期通过研究CD69缺陷小鼠发现CD69可以通过促进TGF-β1的产生下调免疫反应。CD69缺陷导致胶原诱导关节炎动物模型病情加重。在小鼠狼疮模型中，在炎症部位和外周淋巴组织可以检测到CD4+CD69+细胞的存在，这些细胞是失能的，不能合成前炎症细胞因子。<br>　　CD69对免疫细胞具有多重的作用，其与Treg的功能密切相关。然而，CD69如何介导Treg发挥免疫抑制功能仍不明确。在该研究中探讨了CD69表达对Treg免疫调节功能的影响及其机制。发现小鼠体内存在CD4+Foxp3+CD69+Treg和CD4+Foxp3+CD69-Treg两群抑制功能具有明显差别的Treg。CD69+Treg在肠系膜淋巴结中有较高水平的分布，在IBD发病高峰期，脾脏和肠系膜淋巴结的CD69+Treg代偿性增高，因此推测其在维持肠道免疫平衡过程中起重要作用。将CD69+Treg和CD69-Treg分别回输IBD小鼠体内，发现与CD69Treg相比，CD69+Treg能够明显缓解IBD的症状。进一步研究发现，CD69+Treg表达更高的免疫抑制相关分子，其中IL-10的升高较为显著，且IL-10基因缺陷的小鼠来源的CD69+Treg抑制CD4+T细胞增殖的能力较弱，说明IL-10在介导CD69+Treg发挥免疫抑制功能的过程中发挥重要作用。为了验证CD69表达是如何调控IL-10表达，我们构建了含有CD69基因片段的逆转录病毒，将其感染至EL4细胞中，发现CD69过表达后，其IL-10表达水平均有升高，除此之外，我们意外发现c-Maf表达水平也有所增高。有研究表明CD69通过活化JAK3，使其下游底物STAT5被选择性激活，使之转位到细胞核，并结合核内特定DNA调节元件，从而指导基因转录。而c-Maf被报道能够促进Th17细胞IL-10的产生，那么是否CD69活化STAT5来促进c-Maf的表达，从而调控IL-10产生值得深入研究。<br>　　研究表明Treg的可塑性使其分化为效应细胞，体内外诱导的Treg的纯度和稳定性对其潜在的应用是十分重要的，在Th17分化条件下，比较两群Treg分化为Th17的能力，发现相比于CD69-Treg，CD69+Treg能够抵抗IL-6和TGF-β1诱导的向Th17分化的能力，且其p-STAT3的表达水平较CD69-Treg明显降低，而p-STAT5则有所增高。说明在炎性条件下CD69+Treg更加稳定，分别将CD69+Treg和CD69-Treg过继回输到IBD小鼠体内，发现少量CD69+Treg即可明显抑制IBD发生发展，而CD69-Treg缓解疾病能力较差。<br>　　CD69+Treg比CD69-Treg具有更强的免疫抑制效应，并在肠系膜淋巴结中有较高水平的分布。本课题拟通过分选两群Treg，比较其功能、分布及抑制性效应分子，探讨CD69表达对Treg功能的影响及相关分子机制。此外将研究CD4+Foxp3+CD69+Treg是否参与肠道免疫平衡的维持。本课题的完成有望揭示一种新型Treg亚群及其生理功能和肠道免疫平衡形成与维持的新机制。此外，该新型Treg亚群的发现，可为Treg过继回输治疗提供新思路。