换一批miRNA模拟物转染人支气管上皮细胞的影响因素和条件筛选
Influence factors and effective transfection conditions of mock miRNA in human bronchial epithelial cells
摘要目的:研究miRNA模拟物浓度、脂质体浓度、转染时间对人支气管上皮细胞转染效果和毒性的影响,筛选miRNA模拟物转染人支气管上皮细胞的最适宜条件.方法:分别应用0、10、30、50 nmol/L化学合成的、经Cy3标记的miRNA模拟物,以0、0.1%、0.3%、0.5%浓度的脂质体转染剂转染人支气管上皮细胞,转染6、12、24 h后应用荧光显微镜观察细胞转染情况,计算荧光强度,评价转染效果;转染24 h后,应用WST-8法检测不同转染条件对细胞活性的影响.结果:随着miRNA模拟物、脂质体浓度增加和转染时间的延长,细胞内荧光信号增强.30和50 nmol/L miRNA模拟物的转染效率明显高于10 nmol/L组(P<0.05);0.3%和0.5%脂质体组的转染效率明显高于0.1%组(P<0.05);转染24 h的荧光强度明显高于转染12 h和6 h组(P<0.05).与对照组相比,转染24 h后各转染组细胞活性无显著性变化(P>0.05).结论:人支气管上皮细胞适合应用脂质体进行化学合成miRNA模拟物的转染研究,miRNA模拟物浓度、脂质体浓度、转染时间均是转染的重要影响因素,30 nmol/L miRNA模拟物、0.3%脂质体、转染24 h可获得理想的转染效果,转染后对细胞活性无影响.
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分类号
Q291（细胞分子生物学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1004-616X.2010.03.002
发布时间
2010-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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